ICS65.020.20 CCSB16 中华人民共和国国家标准 GB/T33123—2026 代替GB/T33123—2016 斜纹卷蛾检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofCtenopseustisobliquana(Walker) 2026-03-31发布 2026-10-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T33123—2016《斜纹卷蛾检疫鉴定方法》,与GB/T33123—2016相比,除结构调 整和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———更改了“术语和定义”内容(见第3章,2016年版的第3章); ———更改了“斜纹卷蛾基本信息”内容(见第4章,2016年版的第4章); ———更改了“方法与原理”(见第5章,2016年版的第5章); ———更改了“器具和试剂”内容,增加了“仪器设备”的内容(见第6章,2016年版的第6章); ———更改了“现场检查”内容(见第7章,2016年版的7.1); ———更改了“饲养”(见8.1,2016年版的7.2); ———更改了翅脉玻片制作方法(见8.2.3,2016年版的8.2); ———增加了“卷蛾科鉴定特征”(见8.3.1); ———更改了成虫的部分鉴定特征内容(见8.3.3,2016年版的9.2); ———增加了“DNA条形码检测鉴定”内容(见第9章); ———增加了“DNA条形码方法”结果判定内容(见10.2); ———增加了斜纹卷蛾DNA条形码检测鉴定方法(见附录D)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本文件起草单位:青岛海关技术中心、北京林业大学、临沂科技职业学院、烟台海关技术中心、济宁 市任城区农业农村局。 本文件主要起草人:张京宣、肖海军、李金庆、王英超、张秀荣、张静、逄昔莎、殷培军、魏晓棠。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2016年首次发布为GB/T33123—2016; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T33123—2026斜纹卷蛾检疫鉴定方法 1 范围 本文件描述了斜纹卷蛾Ctenopseustisobliquana(Walker)的检疫鉴定方法。 本文件适用于斜纹卷蛾检疫鉴定。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抱器瓣 valva 鳞翅目雄性外生殖器中的成对抱握器官。 注:由第九腹节演变而来的两侧成对的片状结构。多为片状,大而显著。 3.2 爪形突 uncus 昆虫雄性外生殖器的钩状或爪状突起。 注:鳞翅目昆虫背兜后端向下弯曲的片状或者钩状构造。 3.3 尾突 socius 雄性鳞翅目昆虫外生殖器中背兜后缘的棒状突起。 3.4 囊导管 ductusbursae 雌性鳞翅目昆虫中由阴门伸至交配囊的导管。 3.5 囊突 signum 鳞翅目雌性外生殖器中交配囊壁内高度骨化的刺状或小钩状构造。 注:1个或数个。 4 斜纹卷蛾基本信息 中文名:斜纹卷蛾。 中文异名:棕头卷叶蛾、新西兰斜栉柄卷蛾。 学名:Ctenopseustisobliquana(Walker,1863)。 英文名:Obliquetortrix,Light-brownapplemoth,Appleleafroller,Brown-headedleafroller。 异名:CacoeciacharactanaMeyrick,1881,CacoeciainanaButler,1877,Ctenopseustischaractana 1GB/T33123—2026Meyrick,1881,CtenopseustisropeanaFelder&Rogenhofer,1875,Ctenopseustisspurcatana Walker,1863,CtenopseustistranstriganaWalker,1863,CtenopseustisturbulentanaWalker, 1863,SciaphilatranstriganaWalker,1863,SciaphilaturbulentanaWalker,1863,Terasobliquana Walker,1863,TerasspurcatanaWalker,1863,TortrixheranaFelder&Rogenhofer,1875,Tortrix ropeanaFelder&Rogenhofer,1875。 分类地位:属鳞翅目Lepidoptera,卷蛾科Tortricidae,黄卷蛾族Archipini,Ctenopseustis属。 斜纹卷蛾为多食性害虫,是具有经济意义的有害种类,该虫近距离传播可靠成虫自身飞行,借助气 流进行扩散传播,远距离主要以卵、幼虫和蛹等随寄主植物、交通工具传播。斜纹卷蛾其他信息见 附录A。 该属Ctenopseustis分类中和斜纹卷蛾Ctenopseustisobliquana(Walker)近似种主要有以下4种: Ctenopseustisservana(Walker)、CtenopseustisheranaFelder&Rogenhofer、CtenopseustisfilicisDug- dale和CtenopseustisfraternaPhilpott。 5 方法与原理 5.1 形态学鉴定 根据斜纹卷蛾的地理分布、寄主植物、危害状、生物学习性和传播方式等进行现场检疫。在现场可 借助放大镜发现疑似斜纹卷蛾为害的寄主,需重点观察果实、花或者幼茎等位置,取得卵、幼虫、蛹和成 虫样本。依据成虫的形态学特征进行种类鉴定。 5.2 分子生物学鉴定 针对幼虫、蛹或成虫样品,也可通过DNA条形码序列扩增及与斜纹卷蛾参考序列的比对结果进行 种类鉴定。 6 仪器、器具和试剂 6.1 仪器设备 体视显微镜、人工培养箱、PCR(聚合酶链式反应)仪、核酸蛋白检测仪、电泳仪、凝胶成像分析仪、冰 箱等。 6.2 器具 封口袋、指形管、毛笔、剪刀、昆虫针、载玻片、盖玻片、饲养瓶、试剂瓶、放大镜等。 6.3 试剂 无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、5%福尔马林、醋酸红溶液、丁香油、10%氢氧化钠或氢氧 化钾溶液、中性树胶、基因组DNA提取试剂盒、双蒸水(ddH2O)、PCRMasterMix(2×)、引物对CI-J- 1718/CI-N-2191、琼脂糖、1×TAE缓冲液等。除另有规定外,所用试剂均为分析纯。 7 现场查验 仔细观察寄主植物是否有疑似携带斜纹卷蛾的成虫,检查待检寄主有无虫蛀孔、蛀屑或者有疑似虫 道,重点观察寄主植物的果实、花或者幼茎。若发现疑似成虫,用指形管盛装;若发现疑似卵粒、幼虫和 2GB/T33123—2026蛹,可进一步用剪刀等工具进行剖检或者剪取叶片,装入封口袋;同时,注意检查集装箱或者包装材料的 缝隙处是否有虫体疑似物。如发现上述卵粒、幼虫或者蛹,连同寄主植物放入封口袋。加贴标签或编 号,记录时间、地点、寄主、采集人等,带回实验室体视显微镜下观察或饲养后鉴定。 8 实验室鉴定 8.1 饲养 将带有卵或者幼虫的寄主植物一起放入饲养瓶中,瓶盖用纱网封口,置于温度为20℃~28℃、相 对湿度70%~80%的人工气候箱中进行饲养直至成虫羽化。成虫羽化24h后,收集成虫并置于 -20℃以下设备中,放置约30min~60min,以杀死成虫。 8.2 标本的制作 8.2.1 针插标本 成虫标本的制作多采用针插法。成虫用昆虫针定型展翅,制成针插标本。干成虫标本需回软后再 制作。加贴采集标签和鉴定标签。 8.2.2 浸泡标本 幼虫或蛹标本的制作多采用浸液法。将幼虫或蛹先后转入75%乙醇或5%福尔马林保存液的试剂 瓶中,以熔化的石蜡加以密封。加贴种名、产地、采集时间、寄主和采集人等标签信息。如果要备分子试 验用,用无水乙醇浸泡并冷冻保存。 8.2.3 翅脉玻片标本 将成虫的翅放入75%乙醇中,用小毛笔刷去鳞片,顺次放入75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇和无水 乙醇中脱水各约10min,然后放入醋酸红溶液中染色约5min,最后置于丁香油中透明,再放到载玻片 上整形,滴一滴中性树胶封片。 8.2.4 成虫外生殖器玻片标本 用昆虫针取下成虫腹部投入10%氢氧化钠或氢氧化钾溶液中煮沸5min~10min(体视显微镜下 观察,以骨质部分保留深色、肌肉脂肪等溶解为佳);然后转移至培养皿中浸洗3次,用昆虫针解剖,除去 背腹板等物,仅剩第9背板及其附属构造(成虫外生殖器);转移到载玻片上整姿,中性树胶封片。 8.3 鉴定特征 8.3.1 卷蛾科Tortricidae鉴定特征 体型通常为小型到中型,体色多为褐、黄、棕、灰等颜色。成虫的触角长度通常为前翅长的1/3~ 2/3,头部一般具有相当粗糙的鳞片,偶尔还有长毛;单眼明显。下颚须退化或消失,下唇须第二节鳞片 发达,第三节则较短小,末端钝圆。成虫前翅呈长四边形或狭长形,前缘弯曲,静止时保持屋脊状或钟罩 状。有的种类雄蛾前翅前缘基部向上折叠,或带有散发香气的香鳞毛丛。翅脉共12条,各脉彼此分 离,如R4、R5脉可能共柄,M2、M3、Cu1脉在基部靠近,Cu2脉则通常位于中室不及3/4处。后翅的形状 多为亚四边形或宽卵圆形,R5和M1脉靠近或共柄,M2、M3、Cu1脉独立,从同一点或共柄而出。 8.3.2 Ct