ICS65.020.20 CCSB05 中华人民共和国国家标准 GB/T29375—2026 代替GB/T29375—2012 马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程 Technicalcodeofpracticeforvirus-freepotatoin-vitroplantletspropagation 2026-04-30发布 2026-11-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T29375—2012《马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程》,与GB/T29375—2012相 比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 增加了“试管苗”的定义(见3.8); b) 删除了“定期消毒,按照40%的甲醛和高锰酸钾2∶1的比例,40%的甲醛溶液10mL倒入5g 高锰酸钾容器内(每立方米空间用量),进行熏蒸”,更改为“接种室、培养室应保持卫生,每周至 少消毒一次。可使用二氧化氯、臭氧密闭熏蒸,或紫外灯照射结合75%乙醇喷雾等方式消毒” (见4.3.1,2012年版的4.4.1); c) 更改了紫外灯的时间,将“20min”更改为“30min”(见4.3.3,2012年版的4.4.3); d) 删除了若将温室作为培养室的内容(见2012年版的4.4.6); e) 增加了“每天巡查培养苗生长状况,发现污染及时清理,并进行培养室消毒”(见4.3.6); f) 增加了病毒和类病毒的检测方法,删除了“按照GB18133—2000附录A和B的方法检测”(见 6.1.2,2012年版的5.1.2); g) 删除了人工打破休眠的具体方法“用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸种5min”及催芽方法 “可采用0.1%多菌灵溶液浸泡30min或75%乙醇喷湿进行表面消毒,置于25℃黑暗条件下 催芽;或播种于含水量20%灭菌细沙中发芽(水中含5mg/L多菌灵)”(见2012年版的5.1.3.1 和5.1.3.3); h) 更改了材料消毒的方法,将“用50g/L的漂白粉液浸泡7min~10min或0.1%的氯化汞溶液 浸泡5min~10min”更改为“用1%次氯酸钠浸泡7min~10min”(见6.2.2,2012年版的 5.2.2); i) 更改了病毒检测前试管苗转接的长度及检测的表述,将“每株的上部1/3~1/2”更改为“取带 有1个~2个叶片”,将“植株下部1/3~1/2的茎段”更改为“对下部茎段继续培养或直接进行 病毒检测”(见7.1,2012年版的6.1和6.2); j) 增加了病毒病的检测方法,删除了“按照GB18133—2000附录A执行”(见7.2,2012年版的 6.3); k) 更改了基础苗培养条件,将“温度22℃~26℃、相对湿度70%、光照强度2000lx~3000lx、 光照时数16h/d”更改为“温度20℃~26℃、相对湿度50%~70%、光照强度2000lx~ 4500lx、光照时数10h/d~16h/d”(见9.3,2012年版的8.3); l) 更改了基础苗保存条件,将“温度13℃~16℃、相对湿度70%、光照强度3000lx”更改为“温 度8℃~16℃、相对湿度50%~70%、光照强度3000lx~4500lx”(见10.2,2012年版的 9.2); m) 更改了常规扩繁培养基量的表述,将“每瓶加入1/5容量的培养基”更改为“厚度2cm左右” (见11.3,2012年版的10.1.3); n) 更改了扩繁培养条件,将“白天23℃~25℃,夜间16℃~20℃,光照强度2000lx~ 3000lx,光照时间16h/d,培养21d~25d”更改为“白天20℃~26℃,光照强度2000lx~ 4500lx,光照时间14h/d~16h/d,培养18d~25d”(见11.6,2012年版的10.1.6); o) 更改了再次切段繁殖的长度,将“待长出7~8片叶片后”更改为“待长出5个~8个叶片后” ⅠGB/T29375—2026(见11.7,2012年版的10.1.7); p) 删除了水培扩繁和壮苗扩繁的内容(见2012年版的10.2和第11章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国蔬菜标准化技术委员会(SAC/TC467)归口。 本文件起草单位:内蒙古大学、雪川农业集团股份有限公司、四川省农业科学院作物研究所(四川省 种质资源中心)、恩施土家族苗族自治州农业科学院(硒应用技术与产品开发研究院)、宁波市农业技术 推广总站(宁波市种子管理站、宁波市植保植检中心)、定西马铃薯研究所(普通合伙)、甘肃省农业科学 院、重庆市农业技术推广总站、山东省农业科学院、内蒙古宏源农牧业科技股份有限公司、内蒙古民丰种 业有限公司、张家口市农业科学院(河北省高寒作物研究所)、安顺市农业科学院、呼伦贝尔市金满地农 业科技有限公司、内蒙古格瑞得马铃薯种业集团有限公司、黑龙江省农业科学院(黑龙江现代农业研究 院)、中国标准化研究院。 本文件主要起草人:孙清华、冯志文、韩伟、蒲媛媛、王克秀、高剑华、王旭伟、李华泽、田世龙、 欧建龙、董道峰、许向晖、朱艳慧、马恢、张鹏、齐建建、吴健、贾丰收、霍艳姣、盛万民、李进福、李冬虎、 杨丽、张若芳。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2012年首次发布为GB/T29375—2012; ———本次为第一次修订。 ⅡGB/T29375—2026马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程 1 范围 本文件规定了马铃薯茎尖脱毒与组织培养、脱毒试管苗扩繁的技术要求和操作规程。 本文件适用于马铃薯脱毒试管苗的培育和扩繁。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T31790 茄科作物重要类病毒检测鉴定方法 GB/T36816 马铃薯Y病毒检疫鉴定方法 GB/T36833 马铃薯X病毒检疫鉴定方法 GB/T36846 马铃薯M病毒检疫鉴定方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 茎尖 stemtip 有分生组织(0.05mm~0.1mm)及芽原基或正在发育的叶原基的芽顶端部分(0.1mm~10mm)。 3.2 叶原基 leafprimordium 在茎尖生长点的基部形成的突起。 3.3 茎尖分生组织 meristem 茎尖部位具有持续或周期性分裂能力的细胞群。 3.4 离体培养 in-vitropropagation 从植物体分离出符合需要的器官、组织、细胞、原生质体等,通过无菌操作,在人工控制条件下进行 培养,以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。 3.5 脱毒苗 in-vitrovirus-freeplantlet 经检测不带马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯卷叶病毒 (PLRV)、马铃薯M病毒(PVM)、马铃薯A病毒(PVA)、马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)等(类)病毒 的试管苗。 3.6 核心苗 coreplantlet 通过茎尖分生组织培养技术获得的经检测无病毒,经试种观察具有原品种典型性状的脱毒苗。 1GB/T29375—20263.7 基础苗 basicplantlet 由核心苗繁育的、经检测无病毒的脱毒苗。 3.8 试管苗 tissuecultureplantlets 根据不同生产目的与要求,在试管、玻璃瓶等容器中通过基质培养的脱毒苗。 4 脱毒苗生产车间 4.1 布局 4.1.1 周围无污染源,具备隔离条件。 4.1.2 生产车间布局应遵循“环境清洁、便于操作、方便消毒”的原则。 4.1.3 入口处宜有风淋系统,具备更衣室、清洗室、配制室、灭菌室、贮存室、接种室、培养室等,各室应 隔离。 4.1.4 培养室具备充足的自然或人工光源。 4.1.5 脱毒苗生产车间布局平面示意图见图1。 图1 脱毒苗生产车间布局平面示意图 4.2 设备、试剂 4.2.1 配置室设备、器具:见附录A中A.1。 4.2.2 清洗室及灭菌室设备、器具:见A.2。 4.2.3 接种室设备、器具:见A.3。 4.2.4 培养室设备、器具:见A.4。 4.2.5 试剂:见A.5。 4.2.6 茎尖培养基:见附录B。 4.2.7 穆拉希吉-斯库格培养基(MS培养基):见附录C。 4.2.8 扩繁培养基:见附录D。 4.2.9 保存培养基:见附录E。 4.3 卫生要求 4.3.1 接种室、培养室应保持卫生,每周至少消毒一次。可使用二氧化氯消毒剂、臭氧密闭熏蒸,或紫 外灯照射结合75%乙醇喷雾等方式消毒。 4.3.2 接种前接种室应过滤通风。 4.3.3 使用超净工作台时,应提前30min打开紫外灯。接种时打开风机,关闭紫外灯,超净工作台面及 内壁用75%乙醇擦拭消毒。 4.3.4 镊子、剪刀、解剖刀、解剖针等工具使用前应灭菌,且每次接触植物材料的部位应灼烧或插入高 2GB/T29375—2026温灭菌器中灭菌,冷却后使用。 4.3.5 工作人员应穿消毒工作服,洗净双手,且在操作过程用75%的乙醇擦拭手和工作台面。 4.3.6 每天巡查试管苗生长状况,发现污染及时清除,并进行培养室消毒。 5 马铃薯脱毒试管苗繁育程序 马铃薯脱毒试管苗繁育程序包括9个阶段。其中,茎尖培养阶