CEMS `ICS 07.080 C 50 中国环境诱变剂学会团体标准 T/CEMS 0002—2026 人体尿液中双酚类物质的测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of Bisphenols in Human Urine — LC-MS/MS method 2026 - 03 - 10发布 2026 - 03 - 11实施 中国环境诱变剂学会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CEMS 0002 —2026 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利 的责任。 本文件由中国环境诱变剂学会提出并归口。 本文件起草单位： 中国人民解放军陆军军医大学、中国测试技术研究院生物研究所、四川振兴检测 科技股份有限公司、 天津理工大学、 遵义市产品质量检验检测院、 四川 大学、四川省疾病预防控制中心 。 本文件主要起草人： 陈卿、曹佳、张中豪、邹鹏、杨桓、郭橹橹、李彭辉、冯德建 、吴微、邹燕、 李青松、张季、邹晓莉、雍莉、赵 爱平、王智、王芳、钱杉杉、李嘉骏、陈泽羽、李椤颢 。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CEMS 0002 —2026 1 人体尿液中双酚类物质的测定 液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本文件规定了人体尿液中双酚 类物质含量的液相色谱 -串联质谱测定 方法。 本文件适用于人体尿液中双酚 A（BPA）、双酚 F（BPF）、双酚 S（BPS）、双酚 AF（BPAF）、 双酚 AP（BPAP）、双酚 P（BPP）、双酚 Z（BPZ）和四溴双酚 A（TBBPA）含量的测定 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用 文件，仅该日期 对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样经β-葡萄糖苷酸酶 /芳基硫酸酯酶 水解，固相萃取小柱净化，反相色谱柱分离，液相色谱 - 串联质谱仪测定，采用内标法定量。 5 试剂或材料 5.1 试剂 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1.1 乙酸铵（C2H7NO 2）。 5.1.2 冰乙酸（C2H4O2）：色谱纯。 5.1.3 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 5.1.4 乙腈（ C2H3N；色谱纯）。 5.1.5 β-葡萄糖苷酸酶 /芳基硫酸酯酶（酶活力： β-glucuronidase activity ˃100000 units/mL ；sulfatase activity˂20000 units/mL）。 5.2 标准品 5.2.1 双酚 A标准品：纯度≥ 99.0 %；分子式： C15H16O2；CAS号： 80-05-7。 5.2.2 双酚 S标准品：纯度≥ 99.4 %；分子式： C12H10O4S；CAS号： 80-09-1。 5.2.3 双酚 F标准品：纯度≥ 99.8 %；分子式： C13H12O2；CAS号： 620-92-8。 5.2.4 双酚 Z标准品：纯度≥ 99.8 %；分子式： C18H20O2；CAS号： 843-55-0。 5.2.5 双酚 P标准品：纯度≥ 96.8 %；分子式： C24H26O2；CAS号： 2167 -51-3。 全国团体标准信息平台 T/CEMS 0002 —2026 2 5.2.6 双酚 AF标准品：纯度≥ 99.5 %；分子式： C15H10F6O2；CAS号： 1478 -61-1。 5.2.7 双酚 AP标准品：纯度≥ 99.7 %；分子式： C20H18O2；CAS号： 1571 -75-1。 5.2.8 四溴双酚 A标准品：纯度≥ 99.4 %；分子式： C15H12Br4O2；CAS号： 79-94-7。 5.2.9 氘代双酚 A标准品：纯度≥ 97.9 %；分子式： C15D16O2；CAS号： 96210 -87-6。 5.2.10 氘代四溴双酚 A标准品：纯度≥ 99 %；分子式： C15H2D10O2。 5.3 溶液配制 5.3.1 1 mol/L乙酸铵溶液：称取乙酸铵 77 g，加水 950 mL溶解，加冰乙酸调节 pH 5.0，再用水稀 释至 1 L，摇匀。 5.3.2 30 %乙腈溶液：移取 30 mL乙腈，加水 稀释至 100 mL，摇匀。 5.3.3 单一标准储备液：取双酚类物质标准品及内标标准品各约 10 mg（精确至 0.1 mg），分别用 甲醇溶解并定容至 10 mL，配制成质量浓度均为 1000 mg/L的单一标准储备液，于 -18 ℃下保存，有 效期为半年。 5.3.4 混合标准储备液：移取各双酚类物质标准储备液 1.0 mL于同一 100 mL容量瓶中，加甲醇稀 释定容， 摇匀， 配制成质量浓度均为 10 mg/L的混合标准储备液， 于 -18 ℃下保存， 有效期为一个月。 5.3.5 混合标准中间液：移取混合标准储备液 1.0 mL于100 mL容量瓶中 ，加甲醇稀释定容，配制 成各双酚类物质质量浓度均为 100 μg/L的混合标准中间液，现配现用。 5.3.6 内标混合储备液：分别移取两种内标单一标准储备液 1.0 mL于同一 100 mL容量瓶中，加甲 醇稀释定容，摇匀，配制成质量浓度均为 10 mg/L的内标混合储备液，于 -18 ℃下保存，有效期为一 个月。 5.3.7 内标混合中间液：移取内标混合储备液 2.50 mL于100 mL容量瓶中，加甲醇稀释定容，摇 匀，配制成质量浓度均为 250 μg/L的内标混合中间液，现配现用。 5.3.8 系列标准 工作溶液： 分别准确移取适量混合标准中间液，各加入 适量内标混合中间液，用甲 醇稀释定容，摇匀，配制成内标浓度均为 2.5 ng/mL ，双酚类物质质量浓度分别为 0.01 ng/mL、0.02 ng/mL、0.05 ng/mL、0.1 ng/mL、0.25 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL 的系列标准工作溶液，现配现用。 5.4 材料 5.4.1 HLB固相萃取小柱 （60 mg，3 mL）或其他等效柱：使用前依次用 6 mL甲醇、 3 mL水和 3 mL乙酸铵溶液进行活化。 5.4.2 0.22 μm尼龙滤膜 5.4.3 20 mL带塞玻璃管。 6 仪器设备 6.1 液相色谱 -串联质谱仪：配电喷雾离子源（ ESI源）。 6.2 分析天平：感量 0.1 g、0.01 mg和0.0001 g。 6.3 酸度计：精度为 0.01个pH单位， pH值测定范围为 0～14。 6.4 涡旋混匀器 。 6.5 恒温水浴锅。 6.6 固相萃取装置。 6.7 平行浓缩仪器 。 全国团体标准信息平台 T/CEMS 0002 —2026 3 7 样品 人体中段尿液用不含双酚类物质的玻璃或塑料离心管采集后于 -80 ℃冻存待用， 使用前于室温下 解冻后混匀、离心，待前处理。 8 试验步骤 8.1 试样处理 移取 5 mL试样于20 mL带塞玻璃管中 ，加入 4.8 mL 1 mol/L乙酸铵缓冲液和 100 μL内标混合中间 液，混匀，再加入 100 μL β -葡萄糖甘酸酶 /芳基硫酸酯酶，混匀后置于 37 ℃水浴中水解 12 h，取出并 避光冷却至室温，混匀后于 4000 r/min下离心 5 min，取 2 mL上清液过已预先活化的 HLB小柱，依次 用3 mL水、 3 mL30 %乙腈淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱 2 min，再用 6 mL甲醇洗脱，收集洗脱液， 于30 ℃水浴中氮吹至近干， 残渣用 2 mL甲醇复溶，混匀，过 0.22 μm尼龙滤膜后贮存于 棕色进样小 瓶，待测。 8.2 测定 8.2.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱： C18色谱柱， 2.1 mm× 100 mm，粒径 1.8 µm或性能相当者； b) 流动相： A为水，B为甲醇，梯度洗脱程序参见表 1； c) 流量： 0.2 mL/min； d) 柱温： 40 ℃； e) 进样量： 2 µL。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间 /min 流动相 A体积分数 /% 流动相 B体积分数 /% 0 85 15 10 0 100 15 0 100 15.01 85 15 26 85 15 8.2.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下： a） 离子源：电喷雾离子源（ ESI源）； b） 扫描方式： 负离子模式； c） 其他质谱参考条件参见附录 A。 8.2.3 定性测定 在相同实验条件下进行样品测定时，如果样品中待测物的色谱峰保留时间和标准工作溶液中对 应峰的保留时间一致 （相对误差在 ± 2.5 %以内），且样品谱图中待测物监测离子的相对丰度和浓度 相当的标准品的相对丰度一致