ICS 67.050 CCS C 139 团 体 标 准 T/ NAIA 0464—2026 枸杞叶及其制品中酚酸类和黄酮类 化合物含量的测定 高效液相色谱法 Determination of phenolic acids and flavonoids in goji leaves and related products —High performance liquid chromatography 2026-02- 24发布 2026-03- 01实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0464-2026 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第 1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由宁夏医科大学（宁夏医科大学枸杞研究中心）提出。 本文件由宁夏化学分析测试协会归口。 本文件起草单位：宁夏医科大学（宁夏医科大学枸杞研究中心）、宁夏回族自治区药 品检验研究院、宁夏正山堂生物科技有限责任公司、百瑞源枸杞股份有限公司、中宁县吉 利宝枸杞制品有限公司、宁夏中宁枸杞产业创新研究院有限公司。 本文件主要起草人：马学琴、高涛、陈国宁、李嘉森、陈欢、陈剑钰、杨玲玲、王玫、 马金超、付雪艳、杨志刚、李琪、马进花、杨丽丽、李卫兵、韩璐、余君伟。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0464-2026 1枸杞叶及其制品中酚酸类和黄酮类化合物含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了枸杞叶及其制品中酚酸类和黄酮类化合物含量的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于枸杞叶及其制品中酚酸类的新绿原酸 、绿原酸、隐绿原酸 、对香豆酸和黄 酮类的槲皮素 -3-O-芸香糖 -7-O-葡萄糖苷、芦丁、山奈酚 -3-O-葡萄糖鼠李糖苷含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期 的引用文件， 仅该日期对应的版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所 有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的酚酸类和黄酮类成分采用乙醇 溶液超声提取 ，溶液用微孔滤膜过滤 ，用高效液 相色谱法（紫外检测器）测定，外标法定量。 5 试剂 除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 无水乙醇（ C2H6O）。 5.1.2 甲醇（ CH 4O）：色谱纯。 5.1.3 磷酸（ H3PO 4）。 5.2 溶液配制 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0464-2026 25.2.1 乙醇溶液（ 8+2）：量取 80 mL无水乙醇（ 5.1.1）于100 mL容量瓶中，加水定容至刻 度，摇匀备用。 5.2.2 0.3%磷酸溶液 ：量取 3 mL磷酸（ 5.1.3）于1000 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇 匀备用。 5.3 标准品 新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、对香豆酸、槲皮素 -3-O-芸香糖 -7-O-葡萄糖苷、芦丁、 山奈酚 -3-O-葡萄糖鼠李糖苷等标准品的英文名称、分子式、 CAS号及纯度见附录 A。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 标准储备液的配制 ：分别准确称取新绿原酸 、绿原酸、隐绿原酸 、对香豆酸 、槲皮素 -3-O- 芸香糖 -7-O-葡萄糖苷 、芦丁和山奈酚 -3-O-葡萄糖鼠李糖苷 标准品 10.00 mg（精确至 0.00001 g），用乙醇溶液（8+2）（5.2.1）溶解并定容于 10.0 mL棕色容量瓶 ，摇匀，配制成1.00 mg/mL 各标准储备液， 避光 0 ℃~4 ℃保存。 5.4.2 标准中间液的配制 ：准确移取 0.1 mL各标准储备液 （5.4.1）于10.0 mL棕色容量瓶中 ， 用乙醇溶液（ 8+2）（5.2.1）定容至刻度，摇匀， 配制成浓度为 10 μg/mL的各标准中间液， 现配现用。 6 仪器与材料 6.1 高效液相色谱仪（ HPLC），配有紫外检测器。 6.2 分析天平， 感量 0.00001 g及0.001 g。 6.3 超声波清洗仪。 6.4 粉碎机。 6.5 匀浆机。 6.6 有机相微孔滤膜： 0.45 μm。 7 试样制备 7.1 枸杞叶鲜样 将枸杞叶鲜样 3.0 kg放入分样盘， 混匀后用四分法缩分至 0.5 kg～1.0 kg。将缩分后的 枸杞叶鲜样用洁净的剪刀剪碎 ，再放入匀浆机中制成匀浆 ，分装入洁净样品瓶 ，密封并粘贴 样品标签。在 -18 ℃及以下条件保存。 7.2 枸杞叶干样 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0464-2026 3将枸杞叶干样 200 g～300 g倒入分样盘 ，充分混匀后 ，用四分法缩分至 50 g。将缩分后 的样品放入洁净的粉碎机粉碎 ，至全部通过孔径为 0.6 mm（30目）～1.0 mm（18目）的样 品筛，分装入洁净、干燥的样品瓶中，密封并粘贴样品标签。干燥保存。 8 试样提取 8.1枸杞叶鲜样 称取匀浆试样 30.0 g（精确到 0.001 g）于100 mL具塞锥形瓶中，精密加入乙醇溶液 （8+2）（5.2.1）40.0 mL，密塞振摇 ，超声提取 30 min，混匀，取上清液 1.0 mL，置于 10 mL 容量瓶中，加乙醇溶液（ 8+2）（5.2.1）稀释至刻度，摇匀， 用0.45 μm微孔滤膜（ 6.6）过 滤，取滤液上机测定。 8.2 枸杞叶干样 称取粉碎试样 2.0 g（精确到 0.001 g）于100 mL具塞锥形瓶中，精密加入乙醇溶液 （8+2）（5.2.1）40.0 mL，密塞振摇 ，超声提取 30 min，混匀，取上清液 1.0 mL，置于 10 mL 容量瓶中，加乙醇溶液（ 8+2）（5.2.1）稀释至刻度，摇匀， 用0.45 μm微孔滤膜（ 6.6）过 滤，取滤液上机测定。 9 分析步骤 9.1 液相色谱参考条件 色谱柱： C18柱（ 250 mm×4.6 mm，5.0 μm），或性能相当者 。 流动相： A为0.3%磷酸溶液， B为甲醇；梯度洗脱 条件见表 1。 检测波长： 320 nm。 流速： 0.8 mL/min。 进样量： 20 μL。 表1 梯度洗脱程序表 时间（ min） 流动相 A（%） 流动相 B（%） 0 98 2 3 88 12 12 82 18 20 75 25 35 45 48 52 55 65 52 96 98 98 35 48 4 2 2 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0464-2026 49.2 标准曲线的制作 （1）用乙醇溶液 （8+2）（5.2.1）将新绿原酸 、对香豆酸标准中间液稀释得到系列浓度 为0 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L的混合标准工作液；用乙醇溶液（ 8+2） （5.2.1）将新绿原酸 、对香豆酸标准储备液稀释得到系列浓度为 5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L 的混合标准工作液；以上溶液依次由低到高进样检测，色谱图 见附录 B.1。 （2）用乙醇溶液 （8+2）（5.2.1）将绿原酸 、隐绿原酸 、槲皮素 -3-O-芸香糖 -7-O-葡萄糖 苷、芦丁和山奈酚 -3-O-葡萄糖鼠李糖苷标准中间液稀释得到系列浓度为 0 mg/L、0.5 mg/L、 1 mg/L的混合标准工作液；用乙醇溶液（ 8+2）（5.2.1）将绿原酸、隐绿原酸、槲皮素 -3-O- 芸香糖 -7-O-葡萄糖苷 、芦丁和山奈酚 -3-O-葡萄糖鼠李糖苷标准储备液稀释得到系列浓度为 5 mg/L、10 mg/L、50 mg/L、80 mg/L、100 mg/L的混合标准工作液 ；以上溶液依次由低到高 进样检测，色谱图 见附录 B.2。 以质量浓度 ρ（mg/L）为横坐标、 相应的峰面积 A为纵坐标进行线性回归，分别得到 标准曲线回归方程。 9.3 测定 取试样溶液上机测定，色谱图 见附录 B.3。 10 结果计算和表达 试样中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、对香豆酸、槲皮素 -3-O-芸香糖 -7-O-葡萄糖苷、 芦丁和山奈酚 -3-O-葡萄糖鼠李糖苷的含量按公式（ 1）计算： ω=𝜌×𝑉×𝑓 𝑚×1000………………… （1） 式（ 1）中： ω——试样中各待测成分的数值，单位为毫克每克（ mg/g）； ρ——从标准曲线上查得试样中新绿原酸 、绿原酸、隐绿原酸 、对香豆酸 、槲皮素 -3-O- 芸香糖 -7-O-葡萄糖苷、芦丁和山奈酚 -3-O-葡萄糖鼠李糖苷的质量浓度的数值，单位为毫克 每升（ mg/L）； V——试样中加入的提取溶液体积的数值，单位为毫升（ mL）； f——稀释倍数； m——试样的质量的数值，单位为克（ g）； 10