ICS67.080.10 CCSB31 T/HNSKJX 团 体 标 准 T/HNSKJX004—2025 柑橘及其制品中辛弗林的测定 高效液相色谱法 Determinationofsynephrineincitrusanditsderivedproduct Highperformanceliquidchromatography 2025-11-25发布 2025-11-25实施 湖南省食品科学技术学会  发布 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX004—2025 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南省食品科学技术学会提出并归口。 本文件主要起草单位：湖南省农产品加工与质量安全研究所、岳麓山实验室。 本文件主要起草人：尚雪波、李志坚、李绮丽、付复华、何翊、刘伟、谭欢、林树花。 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX004—2025 1柑橘及其制品中辛弗林的测定高效液相色谱法 1范围 本文件规定了柑橘及其制品中辛弗林的液相色谱测定方法。 本文件适用于柑橘及其制品中辛弗林含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样中的辛弗林经乙醇-水提取，微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱-紫外检测器或二极 管阵列检测器检测，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1试剂 4.1.1无水乙醇（C2H5OH，CAS：64-17-5）：分析纯。 4.1.2磷酸（H3PO4，CAS：7664-38-2）：优级纯。 4.1.3甲醇（CH3OH，CAS：67-56-1）：色谱纯。 4.1.4十二烷基硫酸钠（C12H25SO4Na，CAS：2386-53-0）：色谱纯。 4.2试剂配制 4.2.1乙醇-水提取溶剂：用量筒量取乙醇（4.1.1）750mL，去离子水250mL混合均匀。 4.2.20.1%磷酸水溶液（含0.1%十二烷基硫酸钠）：吸取1.00mL磷酸，称取十二烷基 硫酸钠1.00g，加入900mL水溶解，加水定容至1L，混匀。 4.3标准品 辛弗林（C9H13NO2，CAS：94-07-5）：纯度≥98%或经国家认证并授予标准物质证 书的标准物质。 4.4标准溶液配制 4.4.1辛弗林标准储备溶液（1000mg/L）：准确称取辛弗林标准品（4.3）0.01g（精 确至0.0001g），用提取溶剂（4.2.1）溶解并定容至10mL，避光-18℃以下保存，保存 期为6个月。 4.4.2辛弗林标准系列工作溶液：准确吸取辛弗林标准储备溶液（4.4.1）0μL、10μL、50 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX004—2025 2μL、100μL、250μL、500μL、1000μL，用乙醇/水溶液（4.2.1）定容至10mL，轻摇混匀。 辛弗林标准系列工作液质量浓度分别为0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、25.0mg/L、 50.0mg/L、100mg/L，临用时现配。 4.5材料 4.5.1塑料离心管：50mL。 4.5.2容量瓶：10mL、50mL、1000mL。 4.5.3移液器（管）。 4.5.4微孔滤膜：孔径为0.45μm，有机相。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2分析天平：感量分别为0.01g和0.0001g。 5.3超声波发生器。 5.4组织捣碎机。 5.5药物粉碎机。 5.6离心机：转速≥8000r/min。 5.7旋转蒸发仪。 6分析步骤 6.1试样制备 6.1.1鲜果果实样品：取1kg鲜果，用干净纱布轻轻擦去柑橘样品表面附着物，采用四分 法取对角部分，将果皮、果肉和种子分开（宽皮橘和甜橙的果肉保留囊衣，剔除种子；柚子 的果肉，剔除囊衣和种子）。按四分法缩分后将其切碎，用组织捣碎机捣成匀浆后取其中任 意100g样品进行检测。 6.1.2罐头样品：采样量须大于1kg且至少采集3个独立包装（同一批次或批号），放入 组织捣碎机中匀浆后取其中任意100g样品进行检测。 6.1.3果汁及饮料样品：采样量须大于1kg且至少采集3个独立包装（同一批次或批号）， 将内含物混合，充分混匀后取其中任意100g（ml）样品进行检测。 6.1.4枳壳、陈皮：取500g样品，用高速粉碎机粉碎后过筛，使其粒径小于2mm孔径， 混合均匀后缩分至100g样品进行检测。 6.2试样提取 6.2.1果肉、罐头、果汁及饮料 称取试样5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入提取溶剂（4.2.1）10mL超声 处理30min，以8000r/min离心5min，收集上清液于50mL容量瓶中，残渣用10mL提取 溶剂（4.2.1）重复提取两次，合并上清液，用提取溶剂（4.2.1）定容至50mL，经0.45μm 微孔滤膜（4.5.4）过滤后上机检测。 6.2.2鲜果果皮 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX004—2025 3称取试样2g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入10.00mL提取溶剂（4.2.1）， 超声处理30min，以8000r/min离心5min，收集上清液于容量瓶中，残渣用10mL提取溶 剂（4.2.1）重复提取两次，合并上清液，用提取溶剂（4.2.1）定容至50mL，经0.45μm微 孔滤膜（4.5.4）过滤后上机检测。 6.2.3枳壳、陈皮 称取试样0.5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入10.00mL提取溶剂（4.2.1）， 超声处理30min以8000r/min离心5min，收集上清液于50mL容量瓶中，残渣用10mL 提取溶剂重复提取两次，合并上清液，用提取溶剂（4.2.1）定容至50mL，经0.45μm微 孔滤膜（4.5.4）过滤后上机检测。 6.3仪器参考条件 a)色谱柱：C18柱（4.6mm×150mm，5μm）或性能相当的色谱柱； b)流动相：甲醇+0.1%磷酸水溶液(含0.1%十二烷基硫酸钠）=45+55（体积比）； c)流速为1.0mL/min； d)柱温：35℃； e)进样量：20μL； f)检测波长：223nm； 6.4标准曲线的制作 按照6.3设定的色谱工作条件，待仪器稳定后，测定标准系列工作溶液（4.4.2）中辛弗 林的峰面积，以标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 辛弗林标准溶液的色谱图参见附录A。 6.5试样溶液的测定 按照6.3设定的色谱工作条件，待仪器稳定后，测定试样溶液中辛弗林的峰面积，根据 标准曲线得到试样溶液中辛弗林的质量浓度。 7分析结果的表述 试样中辛弗林的含量按公式（1）计算： 10001000 mVX………………………(1) 式中： X—试样中辛弗林的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； ρ—由标准曲线得出的试样溶液中辛弗林的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V—试样定容体积，单位为毫升（mL）； m—试样质量，单位为克（g）； 1000—单位换算系数。 计算结果保留3位有效数字。 8精密度 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX004—2025 4在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。 9检出限和定量限 本方法中，当果肉、罐头、果汁及饮料试样称样量为5g，鲜果果皮试样称样量为2g， 枳壳、陈皮试样称样量为0.5g时，辛弗林的检出限为0.3mg/kg，定量限为1mg/kg。 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX004—2025 5附录A （资料性） 辛弗林标准物质液相色谱图 50mg／L辛弗林标准溶液的色谱图见图A.1，柑橘样品辛弗林提取液的色谱图见图A.2。 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 min050100150200250300350400450mAU 223nm,1nm (2.00) 辛弗林 图A.150.0mg/L辛弗林标准溶液色谱图（223nm） 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 min050100150200250300350400450500550600650700mAU 223nm,1nm (2.00) 辛弗林 图A.2柑橘样品辛弗林提取液色谱图（223nm） 全国团体标准信息平台