ICS67.080.10 CCSB31 T/HNSKJX 团 体 标 准 T/HNSKJX003—2025 柑橘及其制品中11种黄酮类化合物的测定 高效液相色谱法 Determinationof11flavonoidsincitrusanditsderivedproduct Highperformanceliquidchromatography 2025-11-25发布 2025-11-25实施 湖南省食品科学技术学会  发布 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX003—2025 I前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南省食品科学技术学会提出并归口。 本文件主要起草单位：湖南省农产品加工与质量安全研究所、岳麓山实验室。 本文件主要起草人：李志坚、付复华、李绮丽、尚雪波、潘兆平、何翊、谭欢、肖轲。 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX003—2025 1柑橘及其制品中11种黄酮类化合物的测定高效液相色谱法 1范围 本文件规定了柑橘及其制品中芦丁、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、香峰草苷、 柚皮素、橙皮素、甜橙黄酮、川陈皮素、桔皮素等11种黄酮类化合物的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于柑橘及其制品中芦丁、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、香峰草苷、 柚皮素、橙皮素、甜橙黄酮、川陈皮素、桔皮素等11种黄酮类化合物的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引 用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修 改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样中的黄酮类化合物经甲醇-二甲基亚砜混合溶剂提取，微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱 -紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1试剂 4.1.1甲醇（CH3OH，CAS：67-56-1）：色谱纯。 4.1.2二甲基亚砜（C2H6OS，CAS：67-68-5）：色谱纯。 4.1.3甲酸（HCOOH，CAS：64-18-6）：色谱纯。 4.1.4提取溶剂：甲醇-二甲基亚砜（1:1，V/V），用量筒量取甲醇（4.1.1）500mL，二甲基亚 砜（4.1.2）500mL，混合均匀。 4.1.55%甲酸溶液：吸取50mL甲酸（4.1.3），加水混匀定容至1L。 4.2标准品 11种黄酮类化合物标准品：纯度≥98%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。标 准物质信息见附录A。 4.3标准溶液配制 4.3.1黄酮类化合物标准储备液（2000mg/L）：按标准物质证书提供的纯度换算后准确称量11 种黄酮类化合物标准物质（精确到0.0001g），除橙皮苷用提取溶剂（4.1.4）溶解外，其余均用 甲醇（4.1.1）溶解，并定容至10mL，避光于-18℃以下保存，保存期为6个月。 4.3.2黄酮类化合物混合标准中间溶液（100mg/L）：分别精密吸取标准储备溶液（4.3.1）500μL 用甲醇（4.1.1）准确定容至10mL，避光于-18℃以下保存，保存期为1个月。 4.3.3黄酮类化合物混合标准系列工作溶液：分别吸取标准中间溶液（4.3.2）50μL、100μL、 200μL、500μL、1000μL、2000μL、5000μL，用甲醇定容至10mL，轻摇混匀。11种黄酮类化 合物标准系列工作液的质量浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0 mg/L、50.0mg/L，临用时现配。 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX003—2025 24.4材料 4.4.1容量瓶：10mL、25mL、50mL。 4.4.2塑料离心管：50mL。 4.4.3微孔滤膜：孔径为0.45μm，有机相。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配双通道紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2分析天平：感量分别为0.01g和0.0001g。 5.3组织捣碎机。 5.4高速粉碎机 5.5超声波发生器。 5.6离心机：转速≥8000r/min。 6分析步骤 6.1试样制备 6.1.1鲜果果实样品：取1kg鲜果，用干净纱布轻轻擦去柑橘样品表面附着物，采用四分法， 取对角部分，将果皮、果肉和种子分开（宽皮橘和甜橙的果肉保留囊衣，剔除种子；柚子的果肉， 剔除囊衣和种子）。按四分法缩分后将其切碎，用组织捣碎机中捣成匀浆后取其中任意100g样品 进行检测。 6.1.2罐头样品：采样量需大于1kg且至少采集3个独立包装（同一批次或批号），放入组织 捣碎机中匀浆后取其中任意100g样品进行检测。 6.1.3果汁及饮料样品：采样量须大于1kg且至少采集3个独立包装（同一批次或批号），将 内含物混合，充分混匀后取其中任意100g样品进行检测。 6.1.4枳壳、陈皮：取500g样品，用高速粉碎机充分粉碎后过筛，使其粒径小于2mm孔径， 混合均匀后缩分至100g样品进行检测。 6.2试样提取 6.2.1鲜果果肉、罐头、果汁和饮料样品 称取样品5g（精确至0.01g）于50mL离心管（4.4.2）中，加入10mL提取溶剂（4.1.4）， 超声提取30min，8000r/min离心10min，收集上清液于25mL容量瓶中，再重复上述操作1次， 合并2次提取的上清液，用提取溶剂定容，经0.45μm微孔滤膜（4.4.3）过滤后上机检测。 6.2.2果皮、枳壳、陈皮 称取样品1g（精确至0.01g）于50mL离心管（4.4.2）中，加入10mL提取溶剂（4.1.4）， 超声提取30min，8000r/min离心10min，收集上清液于50mL容量瓶中，再重复上述操作2次， 合并3次提取的上清液，用提取溶剂（4.1.4）定容，经0.45μm微孔滤膜（4.4.3）过滤后上机检 测。 6.3色谱参考条件 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX003—2025 3a)色谱柱：C18柱（4.6mm×150mm，5μm）或性能相当的色谱柱； b)流动相：A为甲醇（4.1.1），B为5%甲酸溶液（4.1.5）； c)流速为0.8mL/min； d)柱温：35℃； e)进样量：20μL； f)检测波长：芦丁、甜橙黄酮、川陈皮素、桔皮素为330nm，其余黄酮类化合物为282nm； g)梯度洗脱程序见表1。 表1梯度洗脱程序 时间 min流动相A %流动相B % 0 84 16 10 84 16 32 72 28 57 40 60 58 84 16 65 84 16 6.4标准曲线的制作 按照6.3设定的色谱工作条件，待仪器稳定后，测定标准系列工作溶液（4.3.3）中11种黄酮 类化合物的峰面积。以标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲 线。11种黄酮类化合物标准溶液的色谱图参见附录B。 6.5试样溶液的测定 按照6.3设定的色谱工作条件，待仪器稳定后，测定试样溶液中11种黄酮类化合物的峰面积， 根据标准曲线得到试样溶液中黄酮类化合物的质量浓度。 7分析结果的表述 试样中黄酮类化合物的含量按公式（1）计算： 10001000 mVX…………………………………(1) 式中： X—试样中黄酮类化合物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； ρ—由标准曲线得出的试样溶液中黄酮类化合物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V—试样定容体积，单位为毫升（mL）； m—试样质量，单位为克（g）； 1000—单位换算系数。 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX003—2025 4计算结果保留3位有效数字。 8精密度 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。 9检出限和定量限 本方法中，当鲜果果肉、罐头、果汁和饮料样品称样量为5g，果皮、枳壳、陈皮称样量为1 g时，柑橘及其制品中11种黄酮类化合物的检出限和定量限见附录A。 全国团体标准信息平台 T/HNSKJX003—2025 5附录A （规范性） 11种黄酮类化合物基本信息、定量波长、检出限、定量限 11种黄酮类化合物基本信息、定量波长、检出限、定量限见表A.1。 表A.111种黄酮类化合物基本信息、定量波长、检出限、定量限 序 号名称 CAS号 英文名称 分子式分子量定量波长 nm检出限 mg/kg定量限 mg/kg 1芦丁 153-18-4 Rutin C27H30O16610.52 330 0.5 1.5 2芸香柚皮苷14259-46-2 Narirutin C27H32O14580.53 282 0.3 0.9 3柚皮苷 10236-47-2 Naringin C27H32O14580.53 282 0.3 0.9 4橙皮苷 520-26-3 Hesperidin C28H34O15610.56 282 0.5 1.5 5新橙皮苷13241-33-3NeohesperidinC28H34O15610.56 282 0.3 0.9 6香峰草苷20633-84-5 Didymin C27H30O15594.56 282 0.3 0.9 7柚皮素 480-41-1 Naringenin C15H12O5272.25 282 0.2 0.6 8橙皮素 520-33-2 Hesperetin C16H14O6304.27 282 0.2