ICS 67.220.20 08 分类号：X69 备案号：12497-2003 中华人民共和国轻工行业标准 QB 2583-2003 纤维素酶制剂 Cellulases 2003-09-13发布 2003-10-01实施 中华人民共和国国家发展和改革委员会 发布 QB2583-2003 前言 本标准的第5.4条为强制性的，其余为推荐性的。 本标准参考了联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会的食品添加剂标准纲要第 --卷[Compendium ofFood Additive Specifications,Volume 1,Joint FAO/WHO Expert Committee on FoodAdditive（JECFA)食品工业用酶制剂通则中的“卫生指标”，其一致性程度为非等效。 本标准的附录A、附录B、附录C为规范性附录，附录D为资料性附录。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国食品发酵标准化中心归口。 本标准起草单位：中国食品发酵工业研究院、北京宁馨儿生物科技开发有限公司、诺维信（中国） 生物技术有限公司、中法合资唐山太博尔生物工程有限公司、中国科学院微生物研究所。 本标准主要起草人：张蔚、焦志民、李忠兴、翟文景、赵力、刘建军、崔福绵、田栖静。 本标准首次发布。 QB2583-2003 引言 本标准是针对以木霉属为代表的微生物，经发酵、提取制得的纤维素酶制剂。它是一种纤维素酶 复合物（纤维素酶系），在各种酶的协同作用下使纤维索降解，所以，统称为纤维素酶。一一般来讲，纤 维素酶中的多组分酶系包括外切β-1,4-葡聚糖酶（Exoβ-1,4-glucanase,EC3.2.1.91）、内切β-1,4-葡 聚糖酶（Endoβ-1,4-glucanase,EC3.2.1.4）和纤维二糖酶（Cellobiase,EC3.2.1.21）。不同米源的纤维 素酶制剂产品中三种酶组分含量的比例不同，因此其最终的表观酶活力会有差异。 考忠到市场上的纤维素酶制剂品种繁多，等级不一，酶活力标示方法各不相同，故制定本标准， 以统一国内纤维索酶的测定方法及使用单位，便于使用与交流。 产品分类中酸性纤维素酶、中性纤维素酶是按酶制剂在使用时的最适pH划分；而表1中的pH系 指酶制剂终产品的pH。 附录A、B所述方法，是通过测定纤维素酶降解底物生成的还原糖来反映纤维素酶的总酶活力： 附录C所述方法，是以标准酶为对照，通过测定底物粘度的降低，得到纤维索酶的相对酶活力（侧重 反映纤维素酶的内切酶活力)。生产者和使用者可根据产品的用途选择相应的试验方法。 由于天然纤维素的不溶性、底物结构的多样性，酶系组成、相关浓度和化学结构的不确定性，内 切、外切酶的协同作用以及复杂的作用模式，各种终产物的不断形成及反馈控制等因索的影响，因此， 若使方法获得较好的重现性和再现性，各实验室严格按照标准规定的底物、PH、反应时间与温度等条 件操作是十分重要的。 本标准酶活力的测定，参考了IUPAC、FCC、JECFA推荐的方法以及国内外相关企业标准的测定 方法，通过反复试验、验证修改而成。 QB2583-2003 纤维素酶制剂 1范围 本标准规定了纤维素酶制剂的术语和定义、要求、试验方法、检验规则和标志、包装、运输、贮存。 本标准适用于以术属（Trichoderma）为代表的微生物及其变异株，经液体深层发酵或固态培养 后，精制提纯制得的酸性（或中性）纤维素酶制剂。主要用于食品、纺织、造纸等工业。食品级纤维 素酶制剂也可用作饲料添加剂。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方 研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T191包装储运图示标志 GB/T4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定 GB/T4789.4食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验 GB/T5009.11食品中总砷的测定方法 GB/T5009.12食品中铅的测定方法 GB/T8451食品添加剂中重金属限量试验法 QB/T1803-1993工业酶制剂通用试验方法 QB/T1804工业酶制剂通用检验规则和标志、包装、运输、贮存 JJF1070定量包装商品净含量计量检验规则 国家质量技术监督局[1995]第43号令定量包装商品计量监督规定 3术语、定义、符号、缩略语 下列术语、定义、符号、缩略语适用于本标准。 3. 1 纤维素酶cellulases 在各种酶组分的协同作用下，能降解纤维素，使之变成纤维寡糖、纤维二糖和葡萄糖的酶。 3. 2 滤纸酶活力Filterpaperactivity（FPA） 1g固体酶（或1mL液体酶），在（50土0.1）℃、指定pH条件下（酸性纤维素酶pH4.8，中性纤 维素酶pH6.0)，1h水解滤纸底物，产生出相当于1mg葡萄的还原糖量，为1个酶活力单位，以u/g （或u/mL）表示。 3. 3 羧甲基纤维素酶活力Sodiumcarboxymethylcelluloseactivity（CMCA） 还原糖法1g固体酶（或1mL液体酶），在（50土0.1)℃、指定pH条件下（酸性纤维素酶pH4.8， 中性纤维素酶pH6.0)，1h水解羧甲基纤维素钠底物，产生出相当于1mg葡萄糖的还原糖量，为1个 酶活力单位，以u/g（或u/mL）表示。简写为CMCA-DNS。 1 QB2583-2003 粘度法1g固体酶（或1mL液体酶），在（40土0.1）℃、指定pH条件下（酸性纤维素酶pH6.0 中性纤维素酶pH7.5)，水解羧甲基纤维素钠底物，使底物粘度降低而得到的相对于标准品的纤维索酶 相对酶活力。简写为CMCA-VIS。 4产品分类 4.1按适用pH 分为酸性纤维素酶和中性纤维素酶。 4.2按产品形态 分为固体酶制剂和液体酶制剂两种类型。 5要求 5.1净含量 按国家质量技术监督局[1995]第43号令执行。 5.2外观 固体剂型浅灰色或浅黄色，粉状或颗粒状。无变、潮解、结块现象，无异味。易溶于水，溶 解时允许有少量沉淀物。 液体剂型棕色或褐色液体，无异味，允许有少景凝聚物。 5.3理化要求 理化指标应符合表1的规定。 表1纤维素酶的理化指标 液体剂型 固休剂型 项 日 食品级“ 工业级b 食品级 工业级6 总酶活力° FPA 300 u/g(或u/mL) CMCA-DNS 2 000 ≥ CMCA-VIS 500 pH (25℃) 4.0~7.0 a食品级产品也可用作饲料添加剂。用作饲料添加剂的纤维素酶制剂还应符合其他相关标准法规的要求。 b工业级产品不得用于食品工业及饲料添加剂（食用酒精和蒸馏酒类除外）。 。可根据需要任意标注一种酶活。 5.4卫生要求 卫生指标应符合表2的规定。 表2纤维素酶的卫生指标 液体剂型 固体剂型 项 目 食品级 工业级b 食品级 工业级b 重金属（以Pb计），mg/kg 30 30 铅，mg/kg ≤ 5 5 砷，mg/kg ≤ 3 3 菌落总数，cfu/g 5×104 5×104 大肠菌群，MPN/100g 3X103 3×103 沙门氏菌（25g样） 不得检出 不得检出 a,b同表1。 2 QB2583-2003 5.5保质期 5.5.1在25℃以下，固体酶制剂保质期不少于180d，保质期内酶活力应不低于标示的酶活力。 5.5.2在25℃以下，液体酶制剂保质期不少于90d，保质期内酶活力应不低于标示的酶活力。 6试验方法 6.1净含量 按JF1070执行。 6.2外观 取样品10g（或mL），观察、嗅闻，作出判断，做好记录。 6.3酶活力 6.3.1滤纸酶活力，FPA 按附录A方法测定。 6.3.2羧甲基纤维素（还原糖法）酶活力，CMCA-DNS 按附录B方法测定。 6.3.3羧甲基纤维素（粘度法）酶活力，CMCA-VIS 按附录C方法测定。 6.4 pH 按QB/T1803-1993第9章测定。 6.5重金属 按GB/T8451测定。 6.6铅 按GB/T5009.12测定。 6.7 砷 按GB/T5009.11测定。 6.8菌落总数 按GB/T4789.2测定。 6.9大肠菌群 按GB/T4789.3测定。 6.10沙门氏菌 按GB/T4789.4检验。 7检验规则和标志、包装、运输、贮存 7.1包装储运图示标志按GR/T191执行。 7.2食品级纤维索酶制剂，应在标签（或质量证明）上标注“食品级”字样。 7.3除上述提及条款外，均按QB/T1804执行。 3 QB2583-2003 附录A （规范性附录） 滤纸酶活力（FPA）的测定方法 A.1原理 纤维素酶在一定温度和pH条件下，将纤维素底物（滤纸）水解，释放山还原糖。在碱性、煮沸 条件下，3,5-二硝基水杨酸（DNS试剂）与还原糖发生显色反应，其颜色的深浅与还原糖（以葡萄糖 计）含量成正比。通过在540nm测其吸光度，可得到产生还原糖的量，计算出纤维素酶的滤纸酶活力。 以此代表纤维素酶的酶活力。 A.2试剂和溶液 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 A.2.1DNS试剂 称取3,5-二硝基水杨酸（10士0.1)g，置于约600mL水中，逐渐加入氢氧化钠10g，在50℃水浴 中（磁力）搅拌溶解，再依次加入酒石酸甲钠200g、苯酚（重蒸)2g和无水亚硫酸钠5g，待全部溶解 并澄清后，冷却至室温，用水定容至1000mL，过滤。贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置7d后使用。