SN-T 4279-2015 国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定实验室管理规范

书书书　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜４２７９—２０１５国境口岸医学媒介昆虫犇犖犃条形码鉴定实验室管理规范犃犱犿犻狀犻狊狋狉犪狋犻狅狀狉犲狇狌犻狉犲犿犲狀狋犳狅狉犇犖犃犫犪狉犮狅犱犻狀犵犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犾犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犿犲犱犻犮犪犾犻狀狊犲犮狋犪狋犳狉狅狀狋犻犲狉狆狅狉狋狊２０１５０５２６发布２０１６０１０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检验检疫局。本标准主要起草人：邱德义、岳巧云、陈健、刘德星、聂维忠、魏晓雅、吴可量、胡佳。 Ⅰ犛犖／犜４２７９—２０１５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.国境口岸医学媒介昆虫犇犖犃条形码鉴定实验室管理规范１　范围本标准规定了国境口岸医学媒介昆虫ＤＮＡ条形码鉴定实验室应具备的条件和管理要求等。本标准适用于国境口岸医学媒介昆虫ＤＮＡ条形码鉴定实验室（以下简称实验室）的建立和管理。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ１９４８９　实验室　生物安全通用要求ＧＢ／Ｔ２２２３９　信息安全技术　信息系统安全等级保护基本要求ＳＮ／Ｔ１８７６　医学媒介生物标本采集、制作及保存规程ＳＮ／Ｔ２７５２．４　卫生检疫人员的自我防护规范　第４部分：实验室人员ＳＮ／Ｔ２７７６　国境口岸医学媒介生物监测实验室管理要求ＷＳ／Ｔ２３０　临床诊断中聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的应用３　术语下列术语和定义适用于本文件。３．１犇犖犃条形码　犇犖犃犫犪狉犮狅犱犲生物体内能够代表该物种的、标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的ＤＮＡ片段。ＤＮＡ条形码已经成为物种鉴定的重要工具，在医学媒介昆虫中，一般是指线粒体ＣＯＩ（线粒体细胞色素Ｃ氧化酶亚基Ｉ）上的６５８ｂｐ的标准片段。３．２犇犖犃条形码鉴定技术　犇犖犃犫犪狉犮狅犱犻狀犵犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狋犲犮犺狀犻狇狌犲一种利用ＤＮＡ条形码基因片段进行生物物种鉴定和系统进化关系研究的技术，建立在基因扩增和序列比对的基础之上，它具有不受物种发育状态、雌雄性个体及形态特征完整性与否的限制、减少对分类专家的依赖、不受主观因素影响、准确率高、借助互联网可以实现数据共享等特点。３．３国境口岸医学媒介昆虫犇犖犃条形码鉴定实验室　犇犖犃犫犪狉犮狅犱犻狀犵犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犾犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犿犲犱犻犮犪犾犻狀  狊犲犮狋犪狋犳狉狅狀狋犻犲狉狆狅狉狋狊　　对国境口岸地区及出入境交通工具、货物、集装箱、行李、邮包等截获或者本底调查中所获得的医学媒介昆虫利用ＤＮＡ条形码技术进行鉴定的实验室。除此之外，该实验室还具有媒介昆虫种属鉴定和标本制作等功能。１犛犖／犜４２７９—２０１５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.３．４医学媒介昆虫　犿犲犱犻犮犪犾犻狀狊犲犮狋狊其幼体或成体通过叮咬或者与人类密切接触，直接或者间接地将所携带的病原体传播给人、畜，并使人、畜致病的昆虫纲动物，主要包括蚊类、蝇类、蜚蠊、蠓类和蚤类等。广义的医学媒介昆虫还包括其他节肢动物，如蜱、螨（蛛形纲）等。３．５凭证标本　狏狅狌犮犺犲狉狊狆犲犮犻犿犲狀获取ＤＮＡ条形码等分子数据的来源标本。可以是一头标本的身体上的一部分组织，也可以是同一批同种标本中的一个个体，但必须与本标本的ＤＮＡ条形码数据等分子凭证是一一对应的关系。凭证标本的保存非常重要，必须有唯一性的标本编号、存放、鉴定以及采集等详细信息，以便于日后查证。３．６分子凭证　犿狅犾犲犮狌犾犪狉狏狅狌犮犺犲狉与凭证标本相对应的基因组ＤＮＡ、ＰＣＲ产物、ＤＮＡ条形码序列及峰图，做克隆还应包括含ＤＮＡ条形码片段的阳性转化子。分子凭证的保存非常重要，必须有唯一性并和凭证标本一一对应的编号、存放等详细信息，以便于日后查证。４　缩略语下列缩略语适用于本文件。ＢＯＬＤ：生物条形码数据系统（ｂａｒｃｏｄｉｎｇｏｆｌｉｆｅｄａｔａｓｙｓｔｅｍ）ＮＣＢＩ：美国生物技术信息中心（ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）５　管理要求５．１　组织管理５．１．１　组织管理应按照ＳＮ／Ｔ２７７６的要求，实行实验室主任负责制，设置技术负责人和质量负责人；建立和完善实验室人员岗位职责。５．１．２　实验室应确保检测的规范性、公正性和独立性，不受商业、财务或其他利益冲突的影响。５．１．３　实验室应制定和执行质量管理、人员监督程序，确保检测工作质量。５．２　实验室质量管理５．２．１　实验室应建立质量管理体系文件并遵照实施。５．２．２　实验室质量管理体系文件应覆盖检测鉴定的整个过程。５．２．３　制定程序文件和操作规程的项目至少应包括：标本的制作及管理，仪器与设备的使用、维护和校准，试剂的采购与管理，生物安全管理，ＤＮＡ条形码检测技术与方法，检测结果分析、记录及报告，电子档案管理，数据库维护等。５．３　实验室功能分区５．３．１　根据检测流程分设试剂准备区、标本前处理区、核酸提取区、核酸扩增区、凝胶成像区、数据处理区、标本室等，有条件的可以将每一区域设置为独立的房间。其中，核酸扩增区建设应符合ＷＳ／Ｔ２３０的要求。５．３．２　鉴于ＤＮＡ条形码扩增产物同源性高的特点，实验室需制定措施严防交叉污染，不同作业流程在２犛犖／犜４２７９—２０１５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.不同作业区进行。５．３．３　数据处理区除了拥有用于数据分析所必备的计算机、网络设备外，还应拥有用于员工卫生、休息、更衣等场所和设施，且与作业区相对独立。５．４　人员管理实验室应具备昆虫分类学、分子生物学、生物信息学等专业知识人员，建立持续培训机制，满足口岸医学媒介昆虫的鉴定及检测工作要求。５．５　仪器设备管理仪器设备管理除满足ＳＮ／Ｔ２７７６的要求外，还应包括满足医学媒介昆虫ＤＮＡ条形码鉴定要求的分子生物学仪器、计算机、网络设施等。５．６　安全管理５．６．１　实验室应满足ＧＢ１９４８９和ＳＮ／Ｔ２７７６的一般要求和医学媒介昆虫生物安全管理。５．６．２　实验室应按照ＳＮ／Ｔ２７５２．４的要求做好人员的防病原体污染等自我防护措施。５．６．３　储存ＤＮＡ条形码数据的计算机信息系统应能达到ＧＢ／Ｔ２２２３９规定的第一级安全保护能力。５．７　样品管理５．７．１　实验室应按照ＳＮ／Ｔ１８７６的要求做好医学媒介昆虫标本的制作和保存。５．７．２　凭证标本应妥善永久保存：干制标本低温、低湿永久保存；浸泡标本要定期补充保存液，而且要密封；玻片标本的保存参照ＳＮ／Ｔ１８７６的要求。５．７．３　分子凭证包括所检测样品的基因组ＤＮＡ、ＰＣＲ扩增产物、阳性克隆质粒等，超低温冷冻永久保存。５．７．４　应对所检测的样本及其分子凭证进行统一编号和分类标识。５．８　信息管理５．８．１　凭证标本信息包括：标本名称、标本的唯一性编号、采集地点的ＧＰＳ定位的经纬度、采集人、采集时间、鉴定人、鉴定时间、保存地点、保存方式等。５．８．２　分子凭证需保存的信息包括：基因名称、引物名称及序列、测序的原始图谱及序列、如果克隆还需要有所使用的载体等信息，并且与凭证标本应一一对应。５．８．３　无论是凭证标本还是分子凭证都需要建立台账，借阅和查询都需要登记。５．９　档案管理５．９．１　档案管理应按照ＳＮ／Ｔ２７７６的要求，建立所测样本的完善档案，做好质量记录和技术记录。５．９．２　经序列分析及比对鉴定有效的ＤＮＡ条形码数据上传已建立的医学媒介昆虫ＤＮＡ条形码数据库，同时上传至ＢＯＬＤ系统和ＮＣＢＩ