书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜４ ２ ５ ２—２ ０ １ ５ 出口动物源性食品中咪唑脲苯残留量检测方法液相色谱法和液相色谱 质谱／质谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犻 犿 犻 犱 狅 犮 犪 狉 犫狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾狅 狉 犻 犵犻 狀犳 狅 狉犲 狓狆狅 狉 狋—犎 犘 犔 犆犿 犲 狋 犺 狅 犱犪 狀 犱犔 犆  犕 犛 ／犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ５０ ５２ ６发布 ２ ０ １ ６０ １０ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书中华人民共和国出入境检验检疫行　业　标　准 出口动物源性食品中咪唑脲苯残留量 检测方法 液相色谱法和液相色谱 质谱／质谱法 Ｓ Ｎ／Ｔ４ ２ ５ ２—２ ０ １ ５ 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京市朝阳区和平里西街甲 ２号（１ ０ ０ ０ ２ ９） 北京市西城区三里河北街 １ ６号（１ ０ ０ ０ ４ ５） 总编室： （０ １ ０）６ ８ ５ ３ ３ ５ ３ ３ 网址ｗｗｗ． ｓｐｃ ． ｎ ｅ ｔ ． ｃ ｎ中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 开本８ ８ ０×１ ２ ３ ０ １ ／１ ６　印张１． ５　字数４ ０千字 ２ ０ １ ６年３月第一版 　２ ０ １ ６年３月第一次印刷 印数１—１１ ０ ０ 书号：１ ５ ５ ０ ６ ６·２  ２ ９ ５ ７ ７ 　定价２ ４．０ ０元 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：中国检验检疫科学研究院 ，中华人民共和国河北出入境检验检疫局 。本标准主要起草人 ：李晓娟、李玮、王凤池、艾连峰、彭涛、陈冬东、代汉慧、段文仲。 Ⅰ犛 犖／犜４ ２ ５ ２—２ ０ １ ５ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.出口动物源性食品中咪唑脲苯残留量检测方法液相色谱法和液相色谱 质谱／质谱法 １　范围 本标准规定了出口动物源性食品中咪唑脲苯残留量的液相色谱测定与液相色谱 质谱／质谱确证方法。本标准适用于牛肉 、羊肉、牛肝、羊肝、牛肾、羊肾、牛奶中咪唑脲苯残留量的测定及确证 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　方法提要 试样中的咪唑脲苯用 １％三氟乙酸 乙腈混合溶液提取 ，经混合型阳离子交换固相萃取柱净化 ，高效液相色谱测定 ，外标法定量 ，液相色谱 质谱／质谱法确证 。 ４　试剂和材料 除另有说明外 ，所用试剂均为分析纯 。 ４．１　乙腈：色谱纯。 ４．２　甲醇：色谱纯。 ４．３　三氟乙酸 ：色谱纯。 ４．４　氢氧化钠 ：分析纯。 ４．５　乙酸铵：优级纯。 ４．６　甲酸：分析纯。 ４．７　乙酸：分析纯。 ４．８　０． １％三氟乙酸水溶液 ：取１． ０ｍＬ 三氟乙酸 （４． ３） ，用水稀释并定容至 １０ ０ ０ｍＬ ，混匀。 ４．９　１％三氟乙酸水溶液 ：取１． ０ｍＬ 三氟乙酸 （４． ３） ，用水稀释并定容至 １ ０ ０ｍＬ ，混匀。 ４．１ ０　提取液：１％三氟乙酸水溶液 乙腈（２＋８，体积比） 。取２ ０ｍＬ１％ 三氟乙酸水溶液 （４． ９） ，取８ ０ｍＬ乙腈，混匀。 ４．１ １　洗脱液：５％三氟乙酸甲醇溶液 。取５ｍＬ三氟乙酸 （４． ３） ，用甲醇稀释并定容至 １ ０ ０ｍＬ ，混匀。 ４．１ ２　０． １％甲酸水溶液 ：取０． １ｍＬ 甲酸（４． ６） ，用水稀释并定容至 １ ０ ０ｍＬ ，混匀。 ４．１ ３　定容液：０． １％甲酸水溶液 乙腈（７＋３，体积比） 。取７ ０ｍＬ０． １％ 甲酸水溶液 ，取３ ０ｍＬ乙腈， １犛 犖／犜４ ２ ５ ２—２ ０ １ ５ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.混匀。 ４．１ ４　０． ５ｍ ｏ ｌ／Ｌ氢氧化钠溶液 ：称取４． ０ｇ氢氧化钠 （４． ４） ，用２ ０ ０ｍＬ 水溶解，混匀。 ４．１ ５　０． １％乙酸乙酸铵溶液 （０． ５ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ） ：称取０． ０ ４ｇ乙酸铵（４． ５） ，加入０． ５ｍＬ 乙酸（４． ７） ，用水稀释并定容至 ５ ０ ０ｍＬ ，混匀。 ４．１ ６　弱阳离子交换与反相吸附混合型固相萃取柱 ：Ｏ ａ ｓ ｉ ｓＷＣ Ｘ （６ ０ｍｇ，３ｍＬ） ，或相当者 。使用前用 ３ｍＬ乙腈活化 ，待用。 ４．１ ７　标准品：咪唑脲苯 ，ＣＡ ＳＮ ｏ２ ７ ８ ８ ５  ９ ２  ３ ，纯度大于等于 ９ ８％。 ４．１ ８　标准储备液 ：准确称取咪唑脲苯 １ ０ｍｇ（精确至０． １ｍｇ） ，用甲醇溶解并定容至 １ ０ ０ｍＬ ，配置成浓度约为１ ０ ０μｇ／ｍＬ的标准储备液 。该溶液于 ４℃以下避光保存 ，有效期为 ６个月。 ４．１ ９　标准工作液 ：根据需要用定容液 （４． １ ３）将标准储备液稀释成适当浓度的标准工作溶液 ，标准工作溶液需现用现配 。 ５　仪器与设备 ５．１　液相色谱仪 ：配紫外检测器或二极管阵列检测器 。 ５．２　液相色谱 串联四极杆质谱仪 ：配电喷雾离子源 。 ５．３　分析天平 ：感量为０． ０ １ｇ和０． １ｍｇ。 ５．４　组织捣碎机 。 ５．５　离心机。 ５．６　均质器。 ５．７　固相萃取装置 。 ５．８　旋涡混合器 。 ５．９　氮气吹扫浓缩仪 。 ６　样品制备与保存 ６．１　肌肉、内脏样品取代表性样品约 ５ ０ ０ｇ，取可食部分并切割成小块 ，用组织捣碎机捣碎并混合均匀 ，分成２份，分别装入洁净的容器中 ，密封并标识 。将试样置于 －１ ８℃以下保存 。 ６．２　牛奶样品取代表性样品约 ５ ０ ０ｇ，充分混匀 ，分成２份，分别装入洁净的容器中 ，密封并标识 。将试样置于 ４℃以下避光保存 。 ６．３　在取样、制样和试样保存过程中 ，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 。 ７　分析步骤 ７．１　提取 ７．１．１　肉、肝、肾脏样品 称取５． ０ ０ｇ试样（精确至０． ０ １ｇ） ，置于５ ０ｍＬ具塞离心管中 ，加入１ ５ｍＬ提取液（４． １ ０） ，均质提取 １ｍ ｉ ｎ，然后以４５ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ的转速离心 ８ｍ ｉ ｎ，将上清液转移至 ５ ０ｍＬ 具塞刻度试管中 ，残渣再用 １ ０ｍＬ提取液（４． １ ０）按上述步骤重复提取两次 ，合并上清液 ，并用提取液 （４． １ ０）定容至３ ５ｍＬ。分取出 ７ｍＬ样液（相当于１． ０ｇ样品）于另一离心管中 ，向样液中缓慢滴加氢氧化钠溶液 （４． １ ４）调节样液的 ２犛 犖／犜４ ２ ５ ２—２ ０ １ ５ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.ｐＨ值约为８． ０，然后以４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ的转速离心 ５ｍ ｉ ｎ，待净化。 ７．１．２　牛奶 称取５． ０ ０ｇ试样（精确至０． ０ １ｇ） ，置于５ ０ｍＬ具塞刻度离心管中 ，加入提取液 （４． １ ０）并定容至 ２ ５ｍＬ，涡旋混合 ２ｍ ｉ ｎ，然后以４５ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ的转速离心 ８ｍ ｉ ｎ，分取出５ｍＬ样液（相当于１． ０ｇ样品）于另一离心管中 ，向样液中缓慢滴加氢氧化钠溶液 （４． １ ４）调节样液的 ｐＨ值约为８． ０，然后以４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ的转速离心 ５ｍ ｉ ｎ，待净化。 ７．２　净化 将样液（７． １）转 移 至 ＷＣ Ｘ固 相 萃 取 柱 上 （４． １ ６） ，控 制 样 液 通 过 固 相 萃 取 柱 的 流 速 低 于 ２． ０ｍＬ／ｍ ｉ ｎ，再依次用 ２ｍＬ水和３ｍＬ甲醇淋洗 ，弃去全部流出液 ，用５ｍＬ洗脱液（４． １ １）进行洗脱 ，收集洗脱液 。洗脱液在 ４ ５℃下氮气吹扫浓缩至干 ，加入１ｍＬ定容液（４． １ ３）溶解残渣 ，样液过０． ２μｍ滤膜，供液相色谱或液相色谱 串联质谱测定 。 ７．３　液相色谱测定 ７．３．１　液相色谱参考条件 参考条件如下 ： ａ）　色谱柱：Ｃ ＬＯＶＥ Ｒ  Ｃ １ ８柱，１ ５ ０ｍｍ×４． ６ｍｍ ，粒度５μｍ，或相当者 ； ｂ）　柱温：３ ０℃； ｃ）　进样量：２ ０μＬ； ｄ）　流速：１． ０ｍＬ／ｍ ｉ ｎ； ｅ）　检测波长 ：２ ４ ０ｎ ｍ； ｆ）　流动相组成及梯度洗脱条件 ：见表１。 表１　液相色谱流动相组成及梯度洗脱条件 时间／ｍ ｉ ｎ ０． １％三氟乙酸溶液 ／％ 乙腈／％ ０． ０ ８ ４ １ ６ ４． ０ ８ ４ １ ６ ４． １ １ ０ ９ ０ ９． ０ １ ０ ９ ０ ９． １ ８ ４ １ ６ １ ４． ０ ８ ４ １ ６ ７．３．２　定量测定 在仪器最佳状态下 ，采用相同的分析条件 ，对标准工作溶液和样液等体积参插进样 。以咪唑脲苯色谱峰峰面积对其标准溶液浓度绘制标准工作曲线 。试样中咪唑脲苯的响应值应在线性范围内 ，若其响应值超过线性范围 ，