SN-T 4142-2015 动物源性产品中多种抗生素残留总量检测方法微生物代谢抑制法

书书书　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜４１４２—２０１５动物源性产品中多种抗生素残留总量检测方法微生物代谢抑制法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋狅狋犪犾狉犲狊犻犱狌犲狊狅犳犿狌犾狋犻  犪狀狋犻犫犻狅狋犻犮犻狀犪狀犻犿犪犾  犱犲狉犻狏犲犱狆狉狅犱狌犮狋狊—犕犻犮狉狅犫犻犪犾犿犲狋犪犫狅犾犻犮犻狀犺犻犫犻狋犻狅狀犿犲狋犺狅犱２０１５０２０９发布２０１５０９０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：韩伟、袁辰刚、宋青、顾鸣、朱坚。 Ⅰ犛犖／犜４１４２—２０１５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.动物源性产品中多种抗生素残留总量检测方法微生物代谢抑制法１　范围本标准规定了进出口动物源性食品中总抗生素残留检测的试样制备、保存和微生物代谢抑制检测方法。本标准适用于动物源产品集市贸易市场、食品工厂和实验室对（原料类）肉类、动物内脏、鸡蛋和牛奶中总抗生素残留筛选检测。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法（ＧＢ／Ｔ６６８２—２００８，ＩＳＯ３６９６：１９８７，ＭＯＤ）３　试样的制备和保存３．１　试样制备３．１．１　牛奶：取不少于５００ｍＬ试样，装入清洁容器内，进行标记。３．１．２　肉类、动物内脏：从原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速组织捣碎机均质，充分混匀，用四分法缩分不少于５００ｇ试样。装入清洁容器内，进行标记。３．１．３　蛋类：从原始样品中，随机分出一半（不少于５００ｇ），鲜蛋需去壳，进行标记。３．２　试样保存３．２．１　牛奶：０℃～４℃保存。３．２．２　肉类、动物内脏和蛋：试样于－１８℃以下保存。３．３　保存要求在抽样和制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。４　测定方法４．１　方法提要本方法是利用特定的微生物细菌 — — —嗜热脂肪芽孢杆菌变种（犅犪犮犻犾犾狌狊犛狋犲犪狉狅狋犺犲狉犿狅狆犺犻犾狌狊ｖａｒ．犆犪犾犻犱狅犾犪犮狋犻狊），在一定的营养条件下生长。检测过程中，样品经处理获得样液，样液加到含有一定数量１犛犖／犜４１４２—２０１５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.的嗜热脂肪芽孢杆菌培养基中，６５℃培养３ｈ～４ｈ。若样品中含有抗生素残留，就会干扰微生物的生长代谢，细菌代谢所产生的显色变化将提示抗生素残留的存在与否，即利用抗生素对敏感细菌的抑制作用来判别样品中是否含有抗生素。４．２　设备和材料４．２．１　离心机。４．２．２　高速组织捣碎机。４．２．３　均质器。４．２．４　恒温水浴锅：６５℃。４．２．５　涡旋振荡器。４．２．６　榨汁器。４．２．７　玻璃试管。４．２．８　可调移液器：１０μＬ～１００μＬ，１００μＬ～１０００μＬ。４．３　试剂本标准所用化学试剂为分析纯，试验用水为蒸馏水、去离子水，试验用水应符合ＧＢ／Ｔ６６８２的规定。４．３．１　总抗生素检测试剂盒１），可参见附录Ａ。１）　由意大利Ｅｕｒｏｃｌｏｎｅ公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。４．３．２　抗生素标准溶液（青霉素、四环素、土霉素和金霉素），纯度≥９８％，标准储备均为１０μｇ／ｍＬ，置２℃～８℃冰箱中保存，可使用一个月；标准工作浓度按测定要求配制，置２℃～８℃冰箱中保存，可使用一周。４．４　测定步骤４．４．１　样液制备４．４．１．１　肉类、动物内脏：用肉类榨汁器榨汁，取大约２５０μＬ汁液作为待测样液。４．４．１．２　蛋：取禽蛋液体至清洁容器中，均质后直接取样。４．４．１．３　牛奶：直接取样测定，牛奶样品取样后尽快检测，４℃储存不超过４８ｈ，变质奶会导致假阴性结果。４．４．２　测定４．４．２．１　预先准备好可调式、带顶盖的、温度稳定在６５℃的水浴锅。４．４．２．２　根据检测样品数量，从试剂盒内取出足量的测试管或板孔，然后将不用的测试管或板孔重新封口保存。４．４．２．３　测试管或板孔编号设置，分别加入阴性对照样品、抗生素标准品和样品各２００μＬ到对应的测试管或板孔内。一次性吸嘴对应一个样品，防止交叉污染。４．４．２．４　封闭测试管或板孔，将其放置在６５℃的水浴锅内培养，注意底部浸入水中，防止侧翻。培养温度和时间控制很重要，水浴锅温度应该保持在６５℃±２℃ ，培养３ｈ～４ｈ。４．４．２．５　观察阴性对照管或孔颜色变为黄色时停止培养，观察培养液的颜色变化。２犛犖／犜４１４２—２０１５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.４．５　检测结果判断和报告如果待测样液测试管或板孔颜色由紫色变为黄色，阳性对照测试管或板孔仍呈现紫色，即报告“阴性” 。如果待测样液测试管或板孔和阳性对照待测试管或板孔仍呈现紫色即报告 “初筛阳性 ” 。阳性样品需要用确证方法进行定性和定量分析。５　检测限总抗生素残留测定试剂盒检测抗生素抑制特定微生物生长的最小浓度，即培养后无颜色变化的最小抗生素浓度。检测限见表１。表１　检测限抗生素种类抗生素名称牛奶和蛋类／（ｍｇ／ｋｇ）动物内脏和肉类／（ｍｇ／ｋｇ） β内酰胺类青霉素０．００４０．０２氨苄青霉素０．００４０．０２羟氨苄青霉素０．００４０．０２邻氯青霉素０．０２０．１双氯青霉素０．０１５０．０７５新青霉素０．０８０．４氨基糖甙类链霉素３．５１７．５双氢链霉素５．０２５．０卡那霉素１０．０５０．０新霉素２５．０１２．５０大环内酯类红霉素０．５２．５泰乐霉素０．１０．３交沙霉素０．１０．３６螺旋霉素５．０２５．０柱晶白霉素０．１０．４０四环素类四环素０．１０．５土霉素０．１０．５金霉素０．１０．５利福霉素类利福平０．１５０．７５利福霉素０．０２５０．１２５氯霉素类氯霉素５．０２５．０硝基呋喃类总硝基呋喃类代谢物０．１０．１其他类环氧乙烷０．０１５０．０７５杆菌肽０．３１．５３犛犖／犜４１４２—２０１５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.６　注意事项６．１　如若经过３ｈ培养，阴性对照培养颜色未发生变化，请检查培养温度，并延长培养时间。６．２　对于颜色处于紫色和黄色之间的样品，可能是含有一定量的微生物生长抑制因子，应为疑似结果。６．３　为了保证结果的准确性，待检测样品的微生物本底数量越低越好，并且整个检测过程应避免微生物污染。６．４　使用前如果测试管或板孔中的培养基颜色发生变化，应废弃。试剂盒应保存在４℃～６℃。４犛犖／犜４１４２—２０１５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.附　录　犃（资料性附录）总抗生素检测试剂盒总抗生素检测试剂盒组成：ａ）　附有琼脂培养基的测试管或９６孔板；ｂ）　浓缩萃取液，１０倍，１００ｍＬ／瓶；ｃ）　封口胶。５犛犖／犜４１４２—２０１５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书５１０２—２４１４犜／犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行　业　标　准动物源性产品中多种抗生素残留总量检测方法微生物代谢抑制法ＳＮ／Ｔ４１４２—２０１５ 中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲２号（１０００２９）北京市西城区三里河北街１６号（１０００４５）总编室：（０１０）６８５３３５３３网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 开本８８０×

SN-T 4142-2015 动物源性产品中多种抗生素残留总量检测方法 微生物代谢抑制法

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