书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜３ ８ ５ ３—２ ０ １ ４ 出口食品中曲酸的测定液相色谱 质谱／质谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犽 狅 犼犻 犮犪 犮 犻 犱犻 狀犳 狅 狅 犱 狊犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋—犔 犆  犕 犛／犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ４０ １１ ３发布 ２ ０ １ ４０ ８０ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局 。本标准主要起草人 ：黄娟、柳菡、刘艳、费晓庆、陈雷、杨雯筌、赵增运、沈崇钰。 Ⅰ犛 犖／犜３ ８ ５ ３—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.出口食品中曲酸的测定液相色谱 质谱／质谱法 １　范围 本标准规定了出口食品中曲酸的液相色谱 质谱／质谱测定方法 。本标准适用于出口水果 、蔬菜、鱼、虾、肉罐头、糕点、饮料、糖浆、葡萄酒以及酱菜 、豆面酱、酱油、食醋中曲酸的液相色谱 质谱／质谱测定和确证 。 ２　规范性文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２分析实验室用水规格和试验方法 ３　方法提要 固体样品用乙腈提取 ，液体样品用水稀释并加乙酸锌和亚铁氰化钾沉淀后用液相色谱 质谱／质谱法测定，内标法定量 。 ４　试剂和材料 除非另有说明 ，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂 ，水采用Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２中规定的一级水 。 ４．１　甲酸：高效液相色谱级 。 ４．２　正己烷。 ４．３　甲醇：高效液相色谱级 。 ４．４　乙腈：高效液相色谱级 。 ４．５　乙酸铵：高效液相色谱级 。 ４．６　乙酸锌：Ｚ ｎ（ＣＨ３ＣＯＯ）２·（Ｈ２Ｏ）２。 ４．７　亚铁氰化钾 ：Ｋ４Ｆ ｅ（ＣＮ）６·（Ｈ２Ｏ）３。 ４．８　无水硫酸钠 ：Ｎ ａ２Ｓ Ｏ４。 ４．９　无水硫酸钠 ：６ ５ ０℃灼烧４ｈ，在干燥器内冷却至室温 ，储于密闭干燥器中备用 。 ４．１ ０　０． ０ ０ ５ｍ ｏ ｌ ／Ｌ乙酸铵甲酸溶液 ：准确称取 ０． ３ ８ ５ｇ乙酸铵（４． ５） ，用水溶解并转移至 １０ ０ ０ｍＬ 容量瓶中，加０． ３ｍＬ 甲酸（４． １） ，用水定容至刻度 。 ４．１ １　乙酸锌溶液 （２ ０％） ：准确称取 ２ ３． ９ ３ｇ乙酸锌（４． ６） ，用水溶解并转移至 １ ０ ０ｍＬ 容量瓶中 ，用水定容至刻度 。 ４．１ ２　亚铁氰化钾溶液 （１ ０％） ：准确称取 １ １． ４ ７ｇ亚铁氰化钾 （４． ７） ，用水溶解并转移至 １ ０ ０ｍＬ 容量瓶中，用水定容至刻度 。 ４．１ ３　乙腈饱和的正己烷溶液 ：１ ０ ０ｍＬ 乙腈（４． ４）中加入１ ０ ０ｍＬ 正己烷（４． ２） ，充分振荡后 ，静置分层 ，取上层液体 。 １犛 犖／犜３ ８ ５ ３—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.４．１ ４　曲酸标准品 ：Ｋ ｏｊｉ ｃａ ｃ ｉ ｄ，Ｃ６Ｈ６Ｏ４，ＣＡ Ｓ号：５ ０ １  ３ ０  ４ ，纯度大于等于 ９ ８％。 ４．１ ５　曲酸同位素内标 ：Ｕ ［１ ３Ｃ６］ Ｋ ｏｊｉ ｃａ ｃ ｉ ｄ，浓度为２ ５μｇ／ｍＬ的乙腈溶液 。 ４．１ ６　曲酸标准储备液 ：准确称取适量的曲酸标准品 （４． １ ４） ，用甲醇（４． ３）配制成浓度为 １ｍｇ／ｍＬ的标准储备溶液 。０℃～４℃保存。 ４．１ ７　曲酸标准中间溶液 ：准确移取一定体积的标准储备液 （４． １ ６） ，用水稀释为 １． ０μｇ／ｍＬ，０℃～４℃保存。 ４．１ ８　曲酸内标工作液 ：准确移取一定体积的内标储备液 （４． １ ５） ，用乙腈（４． ４）稀释成１． ０μｇ／ｍＬ， ０℃～４℃保存。 ４．１ ９　微孔滤膜 ：水相，０． ４ ５μｍ。 ５　仪器和设备 ５．１　液相色谱 串联质谱仪 ：配有电喷雾离子源 （Ｅ Ｓ Ｉ） 。 ５．２　分析天平 ：感量分别为 ０． ０ １ｇ和０． ０ １ｍｇ。 ５．３　超声波振荡器 。 ５．４　高速离心机 ：１ ２０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ。 ５．５　涡旋混合器 。 ５．６　氮吹仪。 ５．７　具塞塑料离心管 ：５ ０ｍＬ。 ５．８　容量瓶：２ ５ｍＬ。 ５．９　组织捣碎机 。 ６　试样制备和保存 ６．１　鱼、虾、肉罐头、糕点、酱菜：取代表性样品约 ５ ０ ０ｇ，用组织捣碎机捣碎 ，混匀，均分成两份作为试样，分别装入洁净容器 ，密封并做好标记 ，于－１ ８℃冰箱内保存 。 ６．２　水果、蔬菜：取代表性样品约 ５ ０ ０ｇ，将其可食用部分切碎后 ，用组织捣碎机将样品加工成浆状 ，混匀，均分成两份作为试样 ，分别装入洁净容器 ，密封并做好标记 ，于０℃～４℃冰箱内保存 。 ６．３　酱及酱油 、醋、酒、饮料、糖浆：取代表性样品约 ５ ０ ０ｇ，在混样器中充分混匀 ，均分成两份作为试样 ，分别装入洁净容器 ，密封并做好标记 ，于０℃～４℃冰箱内保存 。 ６．４　在制样和保存的操作过程中 ，应防止样品受到污染或发生分析物含量的变化 。 ７　分析步骤 ７．１　样品处理 ７．１．１　鱼、虾、肉罐头、酱菜、水果、蔬菜、糕点等 称取２ｇ试样（精确到０． ０ １ｇ）置于５ ０ｍＬ具塞塑料离心管中 ，加入２ ０ ０μＬ内标工作液 （４． １ ８） ，加入乙腈（４． ４）１ ０ｍＬ，超声振荡 １ ５ｍ ｉ ｎ后，加入２ｇ左右无水硫酸钠 （４． ９） ，８０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ高速离心 ５ｍ ｉ ｎ。取上层清液收集于 １ ０ｍＬ试管中，于氮吹仪中 ４ ５℃吹干，用１ｍＬ水定容［对鱼、虾等脂肪含量较高的样品，还需加入 ０． ５ｍＬ 饱和正己烷溶液 （４． １ ３）脱脂］ ，于１ ２０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ下离心３ｍ ｉ ｎ后，水层过０． ４ ５μｍ水相滤膜 （４． １ ９） ，供液相色谱 质谱／质谱仪测定 。 ２犛 犖／犜３ ８ ５ ３—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.７．１．２　酱及酱油 、醋、酒、糖浆、饮料等 称取２ｇ试样（精确到０． ０ １ｇ）置于２ ５ｍＬ具塞容量瓶中 ，加入２ ０ ０μＬ内标储备溶液 （４． １ ５） ，加 １ ５ｍＬ水稀释后超声 ５ｍ ｉ ｎ，分别加入 ２ｍＬ２ ０％ 乙酸锌溶液 （４． １ １）和２ｍＬ１ ０％ 亚铁氰化钾溶液 （４． １ ２） ，静置１ ０ｍ ｉ ｎ 后加水稀释至刻度 。混匀，取少量溶液 １ ２０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ高速离心 ３ｍ ｉ ｎ后过０． ４ ５μｍ水相滤膜 （４． １ ９） ，供液相色谱 质谱／质谱仪测定 。 ７．２　测定 ７．２．１　液相色谱条件 液相色谱条件如下 ： ａ）　色谱柱：Ｉ ｎ ｅ ｒ ｔ ｓ ｉ ｌＯＤ Ｓ  ３Ｃ １ ８柱，１ ５ ０ｍｍ×４． ６ｍｍ ，５μｍ，或相当者 ； ｂ）　流动相：乙腈（４． ４）＋０． ０ ０ ５ｍ ｏ ｌ ／Ｌ乙酸铵甲酸溶液 （４． １ ０）＝（５＋９ ５，体积比） ； ｃ）　流速：０． ６ｍＬ／ｍ ｉ ｎ； ｄ）　进样量：５ ０μＬ； ｅ）　柱温：３ ５℃； ｆ）　进样时间 ：１ ０ｍ ｉ ｎ。 ７．２．２　质谱条件 质谱条件如下 ： ａ）　离子化模式 ：电喷雾正离子模式 （Ｅ Ｓ Ｉ ＋） ； ｂ）　质谱扫描方式 ：多反应监测 （ＭＲＭ） ； ｃ）　其他参考质谱条件参见附录 Ａ中表Ａ． １。 ７．２．３　液相色谱 质谱／质谱测定 ７．２．３．１　定性测定 在上述色谱 质谱条件下 ，如果样品中检测的色谱峰保留时间与曲酸标准品相差在 ±２． ５％以内，并且在扣除背景后所选择的两对子离子对与浓度相当标准溶液的相对丰度一致 ，其相对丰度允许偏差不超过表１规定的范围 ，则可判定样品中存在曲酸 。曲酸的保留时间约为 ５． ８ｍ ｉ ｎ ，质量色谱图参见附录Ｂ。 表１　定性确证时相对离子丰度的最大允许误差 相对离子丰度 ／％基峰 ＞５ ０％ ＞２ ０％～５ ０％ ＞１ ０％～２ ０％ ≤１ ０％ 允许的相对误差 ±２ ０％ ±２ ５％ ±３ ０％ ±５ ０％ ７．２．３．２　定量测定 按照液相色谱 串联质谱条件测定样品和标准工作溶液 ，标准曲线法测定样液中的曲酸含量 。样品中被测物量应在标准曲线范围之内 ，如果含量超出标准曲线范围 ，应适当稀释至标准曲线范围之内进行检测。 ７．３　空白试验 除不称取试样外 ，均按上述步骤进行 。 ３犛 犖／犜３ ８ ５ ３—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.８　结果计算和表述 采用内标法定量 ，用色谱数据处理机或按式 （１）计算样品中待测物残留量 。计算结果需扣除空白值。 犡＝犆×犆犻×犃×犃ｓ犻×犞犆ｓ犻×犃犻×犃ｓ×犿×１０ ０ ０…………………………（ １） 　　式中： 犡— — —样品中待测组分残留量 ，单位为毫克每千克 （ｍｇ／ｋｇ） ； 犆— — —标准工作溶液中