ICS 65.020.01 CCSB 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3946—2021 动物源性食品中肌肽、鹅肌肽的测定 高效液相色谱法 Determination of carnosine and anserine in animal-derived foods by high performanceliquidchromatography 2021-11-09发布 2022-05-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3946—2021 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任， 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出。 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口。 本文件起草单位：浙江省农业科学院农产品质量安全与营养研究所、农业农村部农产品及加工品质量 安全监督检验测试中心（杭州）。 本文件主要起草人：朱作艺、王伟、杨华、张玉、王君虹、李雪、孙素玲。 NY/T3946—2021 动物源性食品中肌肽、鹅肌肽的测定 高效液相色谱法 1范围 本文件规定了动物源性食品中肌肽、鹅肌肽的高效液相色谱测定方法 本文件适用于猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鸭肉、鹅肉、鱼肉等动物源性食品中肌肽、鹅肌肽的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条 其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于 文件。 3术语和定义 RESE S 4原理 试样中的肌肽 基薇苯 发生 反应，采用高 粮据保留时间定 RCH 5 试剂与材料 除非另有说明 5.1乙腈(CH3 5. 2 三水乙酸钠（ 5.32,4-二硝基氟 5.4硼酸(HBO3 5.5硼砂(NazB,O 5.6乙酸钠溶液（0.15 L：称 水艺酸钠：加水至 000ml ，经0.45μm微孔滤 膜过滤。 5.7硼酸溶液（0.2mol/L）：称取12.366g硼酸于烧 加水容解后定 1000mL，摇勺。 5.8硼砂溶液（0.05mol/L)：称取19.068g硼砂于烧杯中，加水溶解后定容至1000mL，摇匀。 5.9硼酸-硼砂缓冲溶液：将0.2mol/L的硼酸溶液（ 5.7）和0.05mol/L的硼砂溶液（5.8）按体积比1：4 混合配制成硼酸硼砂缓冲溶液。 5.10肌肽（CHiN,O3，CAS号：305-84-0)：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质。 5.11鹅肌肽（CioH1cN,O3，CAS号：584-85-0)：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质。 5.12肌肽标准储备溶液（1.0mg/mL)：称取根据纯度折算相当于10mg（精确至0.1mg）肌肽标准品， 加水溶解定容至10mL，一18℃保存，备用。 5.13鹅肌肽标准储备溶液（1.0mg/mL）：称取根据纯度折算相当于10mg（精确至0.1mg）鹅肌肽标准 品，加水溶解定容至10mL，一18℃保存，备用。 5.14肌肽、鹅肌肽混合标准中间溶液（200μg/mL）：准确吸取肌肽标准储备溶液2.0mL、鹅肌肽标准储 1 NY/T3946—2021 备溶液2.0mL于10mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀，4℃保存，备用。 5.15肌肽、鹅肌肽混合标准工作溶液：分别吸取肌肽、鹅肌肽混合标准中间溶液（5.14)0.25mL、 0.50mL、1.0ml、2.5mL、5.0mL,加水稀释至10mL，配制成混合标准工作溶液，使得肌肽、鹅肌肽浓 度分别为5.00μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL（无需稀释）。现 用现配。 5.16微孔滤膜：0.22μm、0.45μm，水相。 6主要仪器和设备 6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 6.2分析天平：感量为0.01g和0.0001g。 6.3涡旋混合器或高速组织匀浆机。 6.4离心机：转速不小于5000r/min。 6.5超声波清洗器：功率500W。 6.6高速组织捣碎机。 6.7恒温水浴锅：控温精度土1℃。 6.8微量移液器：0.5μL~10μL。 7试样制备与保存 从所取全部样品中取剔除皮、脂肪、筋、腱后的肌肉组织约200g，用高速组织捣碎机充分捣碎均匀，装 人洁净容器中密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻保存。 8试验步骤 8.1试样提取 称取均质试样2g~5g（精确至0.01g)于50mL聚丙烯离心管中，加水30mL，涡旋振荡或高速组织 匀浆机匀浆1min，放入超声仪中超声提取30min，5000r/min离心10min，将上层提取液转人100mL 容量瓶中；按上述步骤对离心管中的残渣重复提取一次，合并上层提取液，加水定容至100mL，混勾。溶 液经滤纸过滤，滤液作为试样溶液，备用。 8.2混合标准工作溶液和试样溶液的衍生化 分别移取混合标准工作溶液（5.15)和试样溶液（8.1)1.0mL于10mL具塞刻度试管中，依次加入硼 酸-硼砂缓冲溶液8.0mL（5.9）、2,4-二硝基氟苯3.0μL，混匀后放人水浴锅中80℃水浴40min，冷却至 室温后，用硼酸-硼砂缓冲溶液（5.9）定容至10mL，0.22um微孔滤膜过滤，滤液待测。 8.3液相色谱测定 8.3.1仪器参考条件 8.3.1.1色谱柱：Clg柱，4.6mm（内径）×250mm，5μm，或相当者。 8.3.1.2柱温：35℃。 8.3.1.3流动相：0.15mol/L乙酸钠溶液-乙（87十13，体积比）。 8.3.1.4流速：1.0mL/min。 8.3.1.5检测波长：360nm。 8.3.1.6进样量：10μL。 8.3.2标准工作曲线 将衍生后的混合标准工作溶液分别注人高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积。以衍生后标准工 作溶液的浓度（分别为0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL） 为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。肌肽、鹅肌肽标准溶液色谱图见附录A中的 2 NY/T3946—2021 图A.1。 8.3.3试样溶液的测定 将衍生后的试样溶液注人高效液相色谱仪中，以保留时间定性，测得日标化合物相应的色谱峰面积， 根据标准工作曲线得到待测液中日标组分的浓度。待测样液中日标组分的响应值应在仪器检测的线性范 围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。试样溶液肌肽、鹅肌肽色谱图 见图A.2。 8.4平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 8.5空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤（8.1、8.2和8.3.3)同时完成空白试验。 9 结果计算和表述 试样中肌肽（X，）、鹅肌肽（X2)的含量按公式（1)计算。 _(C,-C。)×V×10×J X= (1) mX1000 式中： X; 试样中待测组分含量的数值，单位为克每千克（g/kg）； C: Co 由标准工作曲线得到的空白溶液中待测组分浓度的数值，单位为微克每毫升（ug/mL）； V 试样提取液定容体积的数值，单位为毫升（mL）； 10 试样溶液衍生化反应产生的稀释因子； f 稀释倍数的数值； m 试样质量的数值，单位为克（g）； 1000 单位换算系数。 计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示。含量≥1g/kg时，结果保留 3位有效数字；含量<1g/kg时，结果保留2位有效数字。 10 精密度 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。 11检出限和定量限 本方法称样量为5g时，肌肽、鹅肌肽的检出限分别为0.04g/kg、0.07g/kg，肌肽、鹅肌肽的定量限 分别为0.14g/kg、0.24g/kg。 3 NY/T3946—2021 附录A （资料性） 肌肽、鹅肌肽标准溶液色谱图和试样溶液肌肽、鹅肌肽色谱图 A. 1 肌肽、鹅肌肽标准溶液色谱图 见图A.1。 AU 0.06 鹅肌 图肌肽鹅肌肽标准溶液色谱图 A.2 试样溶液 肌 见图A 儿 0.02 0 30 35 t,min 图A.2 试样溶液肌肽、鹅肌肽色谱图 NY/T 3946-2021 中华人民共和国 农业行业标准 动物源性食品中肌肽、鹅肌肽的测定 高效液相色谱法 NY/T3946—2021 * * 厂食典通 中国农业出版社出版 （北京市朝阳区麦子店街18号楼） （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行各地新华书店经销 * * * 开本880mmX1230mm1/16 印张0.75 字数15千字 2022年1月第1版 2022年1月北京第1次印刷 书号：16109·8779 定价：24.00元 版权专有侵权必究 NY/T3946—2021 举报电话：（010）59194261