ICS 67.080.10 CCS B 31 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3942—2021 水果及其制品中L一苹果酸和D-苹果酸 的测定 高效液相色谱法 Determination of L-malic acid and D-malic acid in fruits and their derived products-High performance liquid chromatography 2021-11-09 发布 2022-05-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3942—2021 全国农业全品 煎服勿言 食典通 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》和GB/T 20001.4一2015《标准编制规则第4部分：试验方法标准》的规定起草 请注意本文件某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部种植业管理司提出。 本文件由全国果品标准化技术委员会（SAC/TC501)归口。 本文件起草单位：中国农业科学院果树研究所、青岛农业大学、青岛市现代农业质量与安全工程重点 实验室、山东农业工程学院、 本文件主要起草人：聂继云、匡立学、沈友明、佟瑶、程杨、徐国锋、李静、闫震、秦旭。 I NY/T 3942—2021 水果及其制品中L-苹果酸和D-苹果酸的测定 高效液相色谱法 1范围 本文件规定了水果及其制品中L-苹果酸和D苹果酸测定的高效液相色谱法。 本文件适用于水果及其制品中L-苹果酸和D苹果酸含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条， 其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的P用义B其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本 文件。 RD 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语 S 4原理 试样用水提取 固相书 取小柱净 检测器检测，以保 留时间定性，峰面积 5试剂或材料 U 除非另有说 近用试 级水 CENTE 5.1乙酸铜[Cu2 5.2L缬氨酸(C NO. 5.3甲醇(CH,O, 5.4流动相：称取 744gL缬氨酸 （5.2），用水溶解并定名 5.5L-苹果酸（C,HC 域经国家讯 证并按 准物质证书的标准 物质。 5.6D苹果酸（C,HOs,CAS 636-61- 经国家认证 详授予标准物质证书的标准 物质。 5.7标准储备液（2.0mg/mL）：分别称取L 果酸（5.6)各20mg（精确至0.1mg）于 10mL容量瓶中，用水溶解并定容，配制成2.0mg/mL 的标准储备液。4℃下保存，有效期3个月。 5.8标准工作溶液：分别量取0.05mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mLL-苹果酸和D 苹果酸的标准储备液（5.7)于6个5mL容量瓶中，定容，配制成混合标准溶液。混合标准溶液中L-苹果 酸和D苹果酸的浓度均为0.020mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL、0.60mg/mL、0.80mg/mL、 1.00mg/mLs 5.9净化柱：反相Cl：固相苯取小柱，200mg/6mL，或性能相当者。 5.10水相型微孔滤膜：孔径0.45μm。 6仪器设备 6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。 NY/T3942—2021 6.2电子天平：感量0.01g、0.1mg。 6.3匀浆机。 6.4超声波清洗机：频率不低于40kHz。 6.5冷冻研磨仪 6.6离心机：转速不低于9000r/min。 6.7固相萃取装置。 7试样的制备 7.1新鲜水果 新鲜水果洗净擦干，取代表性的可食部分约1kg，切碎，用匀浆机制成匀浆，装入洁净容器，密封， 一18℃以下冷冻保存。 7.2果汁 7.2.1带果肉果汁 用匀浆机制成匀浆，装人洁净容器，密封，一18℃以下冷冻保存。 7.2.2不带果肉果汁 摇匀，装人洁净容器，密封，一18℃以下冷冻保存。 7.3水果干制品 样品切成约2mm×2mm的小块，液氮冷冻研磨成粉末，装人洁净容器，密封，一18℃以下冷冻 保存。 7.4水果罐头类 取罐头全部内容物，用匀浆机制成匀浆，装入洁净容器，密封，一18℃以下冷冻保存 8分析步骤 8.1试样溶液的制备 称取5g（精确至0.01g)均匀试样至50mL塑料离心管中，加人20mL水，摇匀，40kHz频率下常温 超声提取20min，9000r/min离心15min，上清液转移至50mL容量瓶中，残渣再用10mL水按上述步 骤重复提取1次，合并2次提取液，用水定容至刻度，摇匀，得到样品提取液。依次用5mL甲醇（5.3）和 5mL水预淋洗、活化固相萃取小柱（5.9）。吸取5mL样品提取液加入活化好的固相苯取小柱中，弃去 2mL初始滤液，收集滤液供高效液相色谱仪分析测定。 8.2液相色谱参考条件 a 色谱柱：Cl8色谱柱，250mm×4.6mm×5μm，或等效的色谱柱； b) 柱温：30℃； c) 流速：1mL/min； (P 进样量：10μL； e） 检测波长：302nm； ) 流动相（5.4)洗脱：等度洗脱30min。 8.3标准工作曲线绘制 按照8.2设定的液相色谱工作条件，待仪器稳定后，依次测定系列标准工作溶液（5.8)中L-苹果酸和 D苹果酸的色谱峰面积。以系列标准工作溶液(5.8)中L-苹果酸和D苹果酸的浓度为横坐标，以峰面积 为纵坐标，绘制L-苹果酸和D-苹果酸的浓度-色谱峰面积标准曲线。标准品色谱图见附录A。 8.4试样溶液的测定 将试样溶液注人高效液相色谱仪，得到色谱峰面积。根据标准曲线得到待测液中L-苹果酸和D苹果 酸的浓度。若试样溶液中测定组分浓度超过标准曲线上限，应稀释至标准曲线浓度范围再行测定。 2 NY/T3942—2021 8.5 5空白试验 除不加入试样外，采用完全相同的分析步骤进行测定。 9 结果计算和表述 试样中L-苹果酸、D苹果酸含量按公式(1)计算。 (C-Co)XVXJ w= (1) m 式中： 试样中L-苹果酸或D苹果酸的含量的数值，单位为克每千克（g/kg)； c 试样溶液中L-苹果酸或D-苹果酸的浓度的数值，单位为毫克每毫升（mg/mL）； Co 空白溶液中L-苹果酸或D苹果酸的浓度的数值，单位为毫克每毫升（mg/mL）； V 提取液体积的数值，单位为毫升（mL）； 试样溶液稀释倍数； 试样的质量的数值，单位为克（g）。 10 精密度 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。 在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的15%。 11 检出限和定量限 当称样量为5.0g时，L-苹果酸和D-苹果酸的检出限为0.030g/kg，定量限为0.10g/kg。 3 NY/T3942—2021 附录A (资料性) L-苹果酸和D-苹果酸标准品的高效液相色谱图 L-苹果酸和D-苹果酸标准品的高效液相色谱图见图A.1。 AU 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 t,min g/ml NY/T 3942-2021 全国农业食品标准 公共服务 中华必食共和国 农业行业标准 水果及其制品中L-苹果酸和D-苹果酸 的测定高效液相色谱法 NY/T3942—2021 * * 食典通 中国农业出版社出片 （北京市朝阳区麦子店街18号楼） （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行 各地新华书店经销 * * * 开本880mm×1230mm1/16 印张0.75 字数15千字 2022年2月第1版 2022年2月北京第1次印刷 书号：16109：8810 定价：24.00元 版权专有 侵权必究 NY/T3942-2021 举报电话：（010）59194261