ICS65.020.01 CCS B 15 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3939.5—2021 甘薯主要病害抗性鉴定技术规程 第5部分：薯瘟病 Technical code of practice for identification of resistance to sweetpotato diseases- Part 5:Sweetpotato bacterial wilt 2021-11-09 发布 2022-05-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3939.5—2021 食典通 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 」第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 NY/T3939—2021《甘薯主要病害抗性鉴定技术规程》分为6个部分： 第1部分：黑斑病； 第2部分：茎线虫病； 第3部分：根腐病； 第4部分：蔓割病； 第5部分：薯瘟病； 第6部分：疮痴病。 本文件是NY/T3939一2021《甘薯主要病害抗性鉴定技术规程》的第5部分。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：江苏徐淮地区徐州农业科学研究所（江苏徐州甘薯研究中心）、福建省农业科学院作 物研究所。 本文件主要起草人：谢逸萍、邱思鑫、刘中华、张鸿、孙厚俊、张成玲、杨冬静、马居奎、谢容寰、唐伟。 I NY/T3939.5—2021 甘薯主要病害抗性鉴定技术规程 第5部分：薯瘟病 1范围 本文件规定了甘薯薯瘟病抗性鉴定的鉴定方法、病情调查与数据计算、抗病性评价、有效性判断。 本文件适用于甘薯薯瘟病抗性鉴定 2规范性引用文件 义中的规范性引用而构成大B件必不可少的条款。 下列文件中的内容通过义 其中，注日期的引用文件，仅 该日期对应的版本适用于 本文件：不注期的引用义 GB4406种薯 A 3术语和定义 RESE 下列术语和定义适用大杀 3. 1 S 甘薯瘟病 Sweetpotato bacterialwilt buehret 起造 由苏科雷尔 成薯苗叶片枯萎、基 部水渍状腐烂、 维管 东变褐 湛至地下 签部枯死等 3. 2 抗病性 diseas seresistance 植物体所具有 的能够 减抵御病原 3.3 病情级别 dises aseting sea 人为量化植物 体或样体发 病程度的数值描述。 3. 4 indek 病情指数 disease 通过对植株个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的 直化描述。 4鉴定方法 4.1鉴定材料准备 每品种剪取3组薯苗，每组7株10株，挂上名称 试验重复的标牌，备用。 4.2培养基制备 4.2.1固体培养基 马铃薯200g，脱皮洗净煮开10min后用汁弃残渣，蔗糖20g，蛋白陈5g，牛肉浸膏3g，琼脂16g。 蒸馏水定容至1000mL，pH7.2，121℃高压灭菌25min。 4.2.2液体培养基 制备方法同4.2.1，不加琼脂条。 4.3病原菌分离及保存 采集具有甘薯瘟病典型症状的病样，在无菌条件下分离纯化，经致病性鉴定和致病型鉴定后移至固体 斜面培养基上培养，保存备用。病原菌的分离、致病型鉴定及病原菌保存方法见附录A。 1 NY/T3939.5—2021 4.4接种液制备 取纯化后的菌株于含TTC的固体培养基划线活化，挑取单菌落于液体基培养20h,按培养基1%的接种 量，取菌液在无菌条件下转移至装有液体培养基的三角瓶（按50%的装液量预先配制的液体培养基），28℃， 180r/h培养36h，至有乳白色气泡出现且较多时取出检测悬浮液浓度，配成浓度为3X10°CFU/mL的菌 液，备用。 4.5接种与栽种管理 4.5.1接种 在7月～8月高温季节，将待鉴定薯苗基部新鲜剪口浸入制备好的薯瘟病菌悬浮液中3cm左右约 20min,取出晾干后裁入鉴定圃中。 4.5.2栽种管理 起垄栽种，垄距75cm～85cm，株距20cm～25cm。设3次重复，随机区组排列，每处理栽1垄， 7株～10株。同时栽种抗病对照和感病对照。栽种后正常管理，保持土壤湿度在85%～95%。 5病情调查与数据计算 5.1病情调查 栽后60d～90d调查发病情况，逐株剖茎检查维管束变褐程度，病情分级标准如下： 0级：日测无症状； -1级：地下茎维管束变褐，薯块无受害状； 3级：茎维管束变褐扩展至地上部，薯块受害5%以内； -5级：茎维管束褐变扩展至地上部，薯块受害5%～25%； 7级：拐头腐烂少结薯，薯块受害大于25%； 9级：植株枯死或拐头腐烂不结薯。 5.2数据计算 依据病情调查情况，按公式（1)计算病情指数，精确至0.1。 Z(N; Xi) DI= MX9 X100 (1) 式中： DI 病情指数； N; 第i病害级别的株数； i 病情级别值； M 调查的总株数。 6抗病性评价 根据病情指数评价甘薯瘟病抗病性，将甘薯品种划分为高抗、抗病、中抗、感病、高感共5个抗性类型， 评定标准如下： 高抗：病情指数<5.0； 抗病：5.0<病情指数≤20.0； 中抗：20.0<病情指数<50.0； 感病：50.0<病情指数≤80.0； 高感：80.0<病情指数<100。 7有效性判断 感病对照品种病情指数≥80时，该批次鉴定视为有效。评价品种抗病性应是2年鉴定一致的结果， 若鉴定结果不一致，以抗性级别低的结果为准。 2 NY/T3939.5—2021 附录A （资料性） 薯瘟病病原菌分离、致病型鉴定及保存方法 A.1薯瘟病病原菌分离与鉴定 从田间采集发病植株，取植株基部茎段放入保鲜代中带回，在超净工作台中用无菌刀削去病部（褐色 维管束处)茎段的表皮，将变色维管束部的组织取出，剪成碎段（约2mm)放在消毒过的载玻片上，加无菌 水，待菌溢出（看到混浊的乳白色状）后，用无菌接种环蘸取菌悬液划线至加200μL1%的TTC（2，3，5氯 化三苯四氮唑）的固体培养基上面。28℃培养36h40h，见到红色斑点上有乳白色菌落，再挑至加TTC 的PSA培养基上纯化培养，28℃培养36h～40h。用甘薯瘟特异鉴定引物（SPRS-F：5'-GACACAT （反应条件为94℃预变性4min，94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸90s，循环30次，72℃延伸 5min)，扩增出1.6kb的产物。鉴定正确菌落，采用剪叶法接甘薯品种新种花，接种7d内可造成叶片黄 脱落的为强致病力菌株，将致病性较强的菌株保存备用。 A.2薯瘟病病原菌致病型鉴定 将上述分离鉴定的病原菌培养的细菌悬浮液以剪叶法接种甘薯品种新种花、金山57和湘薯75-55等 甘薯抗瘟鉴定对照品种上，发病后根据3个对照品种发病情况区分致病型：新种花表现感病，而金山57和 湘薯75-55表现抗病的属1型菌；新种花和金山57表现感病，而湘薯75-55表现抗病的属Ⅱ型菌。 A.3薯瘟病病原菌保存 将上述强致病力甘薯瘟病病原菌用试管培养基斜面，28℃培养2d，将长好无污染的病原菌斜面加 入无菌水3mL，配制菌悬液，吸取菌悬液到另一无菌保存管中，调节菌的浓度至1X108CFU/mL,放置于 20℃温箱保存备用。该方法可保存薯瘟病病原菌2年～3年活化转接1次。将保菌株用于抗病性鉴定时 需先于含TTC的平板上培养，挑取中间淡红边缘白的单菌落培养后接种新种花进行致病力检测，保证菌 株有较强的致病力。 3 NY/T 3939.5—2021 附录B (资料性） 对照品种的选择 薯75-55”作为抗病对照品种，以“新种花”作 新种花：20世纪50年代中期，福建省安溪县湖头镇农民育种家陈罗庚培育出的甘薯新品种，高感薯 瘟病。 金山57：福建农学院 抗薯瘟I型菌，感薯瘟Ⅱ型菌 RD 湘薯75-55：湖南省农 定，抗薯瘟I和I型菌 人 NY/T 3939.5-2021 全国农业全品标准 公共服务 中 华人民共和国 农业行业标准 甘薯主要病害抗性鉴定技术规程 第5部分：薯瘟病 NY/T3939.5—2021 食典通 * * * 中国农业出版社出版 （北京市朝阳区麦子店街18号楼） （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行 各地新华书店经销 * * * 开本880mmX1230mm1/16 印张0.75 字数15千字 2022年2月第1版 2022年2月北京第1次印刷 书号：16109·8845 定价：24.00元 版权专有 侵权必究 NY/T3939.5—2021 举报电话：（010）59194261