ICS 65.020.01 CCS B 15 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3939.4—2021 甘薯主要病害抗性鉴定技术规程 第4部分：蔓割病 Technical code of practice for identification of resistance to sweetpotato diseases- Part 4:Sweetpotatofusariumwilt 2021-11-09 发布 2022-05-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3939.4—2021 公共服务 食典通 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化义件的结构和起草规则》的规定 起草。 NY/T3939—2021《甘薯主要病害抗性鉴定技术规程》分为6个部分： 第1部分：黑斑病； 第2部分：茎线虫病； 第3部分：根腐病； 第4部分：蔓割病； 第5部分：薯瘟病； 第6部分：疮痴病。 本文件是NY/T3939—2021《甘薯主要病害抗性鉴定技术规程》的第4部分。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：江苏徐淮地区徐州农业科学研究所（江苏徐州甘薯研究中心）、福建省农业科学院作 物研究所。 本文件主要起草人：谢逸萍、邱思鑫、刘中华、张鸿、欧建龙、黄立飞、孙厚俊、张成玲、杨冬静、马居奎、 蒋玉峰、谢睿寰、唐伟。 I NY/T3939.4—2021 甘薯主要病害抗性鉴定技术规程 第4部分：蔓割病 1范围 本文件规定了甘薯蔓割病抗性鉴定的鉴定方法、病情调查与数据计算、抗病性评价、有效性判断。 本文件适用于甘薯蔓割病抗性鉴定 2规范性引用文件 其中，注日期的引用文 本文件。 GB4406 种薯 3术语和定义 下列术语和定 义适用 3. 1 甘薯蔓割病 sweetpotato fusarium wit 由尖孢镰刀菌 甘营专 七型Fusariumorsporum lansf en引起，造成 叶片发黄，茎基部 大，纵 ，露出髓部，剖视可见维管束变为黑褐色，裂开 CH 烂状，维管束呈褐色斑点症 3. 2 抗病性 植物体所具有 能够减 卸病原体致病作用的可选 3. 3 R 病情级别 disease ating scale 人为量化植物个体或群体爱病程度的数值描 3. 4 病情指数diseaseindex 通过对植株个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述。 4鉴定方法 4.1鉴定材料准备 将符合GB4406要求的种薯在无病苗床排种育苗，薯苗离苗床土层5cm剪下，长度20cm～25cm。 每品种剪取3组薯苗，每组10株，挂上名称、编号、试验重复的标牌，备用。 4.2培养基制备 4.2.1PDA培养基 马铃薯200g，脱皮洗净加800mL蒸馏水煮开10min后纱布过滤弃残渣，加煎糖20g，琼脂16g。 蒸馏水定容至1000mL，pH7.2,121℃高压灭菌25min。 4.2.2麦粒培养基 每500g麦粒加1000ml自来水煮开5min后倒掉水，将麦粒装瓶后121℃高压灭菌25min后取出 备用。 1 NY/T3939.4—2021 4.3病原菌分离及保存 采集具有甘薯蔓割病典型症状的茎蔓，将病部（褐色维管束处）茎段用75%酒精消毒3min，2%次氯 酸钠消毒5min，无菌水清洗两遍，在超净工作台中将发病部位1cm长维管束挑出至含100ug/mL链霉 素的PDA培养基上面，28℃培养48h，有菌丝产生后转移培养至孢子形成，单孢纯化，回接至对照品种出 现典型蔓割病症状，复壮至强致病力，保存备用。病原菌复壮及保存方法见附录A。 4.4接种液制备 将4.3纯化好的病原菌于麦粒培养基上培养后，按照体积比1：1加入无菌水放人无菌容器中， 浸泡并捣碎麦粒配成孢子悬浮液，用双层纱布过滤，4000r/min离心10min，无菌水稀释，制备成 5×106CFU/mL的菌液，备用。 4.5接种及栽种管理 4.5.1接种 将待鉴定薯苗基部新鲜剪口浸人制备好的蔓割病菌孢子悬浮液中3cm约20min，取出晾干后栽入 鉴定围中。 4.5.2栽种管理 起垄裁种，垒距75cm～85cm，株距20cm～25cm。设3次重复，随机区组排列，每处理栽1垄，10 株。同时栽种抗病对照和感病照，种植未接种病原孢子的感病品种为空白对照。栽种后正常管理，保持土 壤湿度在90%以上。 5病情调查与数据计算 5.1病情调查 裁后约30d逐株调查甘薯的根部和茎部发病情况，剖茎检查维管束变褐程度。病情分级标准如下： 0级：日测无症状； 一1级：地上部生长正常，茎基部维管束变褐在小于植株长度的25%； -3级：地上部基本正常，茎基部维管束变褐在植株长度的25%～50%； -5级：茎基部叶片变黄，维管束变褐在50%以上； -7级：植株叶片多数变黄枯死，茎部维管束变褐扩展及顶芽； -9级：全株枯死。 5.2数据计算 依据病情调查情况，按公式（1)计算病情指数，精确至0.1。 (N; Xi) DI= X 100 MX9 (1) 式中： DI 病情指数； N, 第i病害级别的株数； i 病情级别值； M调查的总株数。 6抗病性评价 根据病情指数评价甘薯蔓割病抗病性，将甘薯品种划分为高抗、抗病、中抗、感病、高感5个抗性类型 评定标准如下： 高抗：病情指数<20.0； 抗病：20.0<病情指数≤40.0； 一中抗：40.0<病情指数≤60.0； —感病：60.0<病情指数≤80.0； 2 NY/T3939.4—2021 高感：80.0<病情指数≤100。 7有效性判断 感病对照品种病情指数≥80时，判定鉴定结果有效。评价品种抗病性应是2年鉴定一致的结果，若 鉴定结果不一致，以抗性级别低的结果为准。 3 NY/T3939.4—2021 附录A (资料性） 甘薯蔓割病病原菌复壮及保存方法 A.1病原菌复壮 将分离纯化的病原菌接种于PDA平板上，28℃培养约一周.待孢子形成后，用无菌纯水洗孢子，孢子 悬浮液用双层沙布过滤，检查滤液中的孢子含量，并用无菌水将孢子配置成5X10°CFU/mL的悬浮液。 将新鲜剪的甘薯蔓制病感病品种新种的种Bk度约30cm)基部3cm浸人配置好的蔓割病病原 菌孢子悬浮液中约20 0 min后，取出晾十 上。观察植株的发 病情次 状后再 发病株植 原菌 音养后再按上述方法接种 到甘薯蔓割病感 病品种新 状可达到 分级标准的9级，则其接种的 病原菌可用作 A.2病原菌保存 S A.2.1金 斜面低温保藏 将上述强致病力甘 兽蔓割病病原菌用试管 将长出白色典型的 白色蔓割病 原菌菌丝的斜面试管寒部分用油纸包扎好，放置冰箱保 备用， 病 个月转管1次，菌 株培养及保 过程要经常检查及时淘汰被细菌、黄曲霉青霉菌等污染的培 养物。将保菌株用于抗病性鉴 定时需先接种 新和花进行致病力检测，保证菌株有较强的致病力，孩方法 可用作病害抗性鉴定期间的病 原菌保存，方 鉴定使 A.2.2甘油冷冻保藏 C 将上述强致 病薯 PD 用无菌 8瑞 纯水洗出孢子，孢子悬 浮液用双层沙布 滤离 水将拖子配置成10”CEU 的 液，加人灭菌甘油， -70℃或液氮保存。 用该法保藏的菌 出孢子后，接种新种花进行 致病力复壮。该方法适台病原菌的中长期菌种保藏，保藏时间3年 NY/T3939.4—2021 附录B (资料性) 对照品种的选择 本文件中对照品种应选择目前生产上认可度一致的蔓割病抗病和感病品种，推荐以“金山57”和“湘 薯75-55”作为抗病对照品种，以“新种花”作为感病对照品种为宜。 新种花：20世纪50年代中期，福建安溪县湖头镇农民育种家陈罗庚培育出甘薯新品种，高感蔓割病。 金山57：福建农业大学杂交育成，1993年通过福建省农作物品种审定委员会的审定，高抗蔓割病。 湘薯75-55：湖南省农业科学院作物研究所杂交育成，1990年通过福建省农作物品种审定委员会审 定，高抗蔓割病。 5