(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210934971.8 (22)申请日 2022.07.28 (71)申请人 广西大学 地址 530004 广西壮 族自治区南宁市西乡 塘区大学东路10 0号 (72)发明人 黄胜　张容博　张君成　张正淳　 (51)Int.Cl. C12M 1/38(2006.01) C12M 1/34(2006.01) C12M 1/24(2006.01) C12M 1/02(2006.01) C12M 1/00(2006.01) C12Q 1/18(2006.01) G01N 1/28(2006.01) (54)发明名称 一种用点 滴板混制药物微平板的制备方法 (57)摘要 本发明涉及微生物学与植物病理学技术， 具 体是一种采用点滴板， 在70℃温度体系的微平板 混样台的工作条件下， 将微少量的药物样品液与 水琼脂混合， 制备成含有药物的琼脂微平板。 微 平板混样台的主要构件包括控温体A， 混样用点 滴板预热构件B， 药物样品预热构件C， 枪头预热 构件D， 载玻片预热瓷砖板构件E。 药物微平板的 制备方法主要步骤如下： 1)药物样品准备， 2)混 样用水琼脂准备， 3)枪头处理， 4)启动混样台进 入工作状态， 5)样品预热， 6)载 玻片预热， 7)注入 样品液， 8)注入水琼脂， 9)均匀混合， 10)展开成 药物微平板。 本发明的优点： 1)点滴板可反复灭 菌使用； 2)需要药物样品的总量微少； 3)制备的 药物微平板 便于后续的生物测定和显微镜观察。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 115181656 A 2022.10.14 CN 115181656 A 1.一种药物微平板混样台， 其特征是， 主要构件包括控温体(A)、 混样用点滴板预热构 件(B)、 药物样品预热构件(C)、 枪头预热构件(D)、 载玻片预热瓷砖板构件(E)， 混样台适配 在超净工作台上应用； 控温体(A)主要构件包括盆状容器(A1)、 水体(A2)、 水体电热控温构件(A3)、 水体水面 盖板(A4)， 水体电热控温构件(A3)能将水体自动加热并稳定水体温度至70℃的工作状态， 水体水面盖 板(A4)能防止水体的快速蒸发与降温； 混样用点滴板预热构件(B)主要包括点滴板(B1)、 点滴板垫架(B2)， 点滴板(B1)有一半 厚度浸埋入水体(A2)中； 药物样品预热构件(C)主要包括样品管(C1)、 和样品管管架(C2)， 样品管(C1)的管身直接浸埋入 水体(A2)中； 枪头预热构件(D)主要包括枪头盒(D1)、 和枪头 盒夹架(D2)， 枪头盒(D1)的盒身浸埋入水体(A2)中； 载玻片预热瓷砖板构 件(E)主要包括瓷 砖板(E1)、 和瓷砖板托架(E2)， 部分瓷砖板(E1)浸埋入水体(A 2)中。 2.利用权利要求1的药物微平板混样台制备含有药物的微平板的一种制备方法， 其特 征是， 将混样台置入超净工作台， 用点滴板作为药物与琼脂的混合器具， 用瓷砖板作载玻片 的预热板， 在水体为70℃的技 术体系中制备含药微平板， 制备 方法步骤如下： 1)药物样品准备： 将药物研发工作中取 得的少量药物样品移入灭菌的样品管(C1)内； 2)混样用水琼脂准备： 混样用水琼脂配比为： 琼脂40g、 水1000ml， 加热熔化后维持在90 ℃以上的水浴中； 3)枪头处理： 使用量级为200μl的常规枪头， 先将该枪头尖头切去一小段， 然后将截去 尖头的枪头按常规方式装 入枪头盒、 灭菌和烘干， 再把该枪头盒固定 于枪头盒夹架(D2)上； 4)启动混样台进入工作状态： 首先正常启动运行超净工作台， 再将混样台放置入超净 工作台内部的工作桌面， 然后取灭菌的点滴板， 平置在点滴板垫架(B2)架上， 再接通混样台 的电源， 电加热和调控 水体(A2)温度到70℃的工作状态， 维持运行至使点滴板(B1)、 枪头盒 (D1)内的枪头、 和载玻片预 热瓷砖板(E1)处于与70℃水体温度平衡的工作状态； 5)取步骤1)的药物样品管(C1)插入浮架在 水体(A2)水面上的样品管管架(C2)的管孔， 在水体(A 2)中预热； 6)取灭菌载玻片平放于载玻片预 热瓷砖板(E1)的板面上 预热； 7)用移液枪套上步骤4)工作状态的枪头， 从步骤5)的预热样品管内吸取100 μl样品液， 注入步骤4)工作状态的点 滴板(B1)的一个凹穴内， 在穴底形成一个样品液滴； 8)用移液枪套上步骤4)工作状态的枪头， 吸取步骤2)的混样用水琼脂30μl， 注入步骤 7)形成的样品液滴内， 并保持移液枪头在液滴内， 反复吸液排液动作， 洗涤下枪头内的残 余 琼脂， 取得样品液与水琼脂混合的混样液； 9)用已调整吸液量为150 μl的移液枪， 套上步骤4)工作状态的枪头， 将枪头插入步骤8) 取得的混样液内， 作反复吸液排液动作， 使得混样液中的样品液与水琼脂充分均匀混合； 10)将步骤9)的均匀混样液全部吸入枪头， 转到步骤6)的预热载玻片， 在载玻片的不同 位点上， 以分段点状形式排出移液枪的混样液到载玻片面上， 并用枪头将排出 的液点拨动 平展， 使得各个液点形成一个薄层琼脂微块， 然后将该载玻片转到常温保湿的无菌器皿内 放置， 薄层琼脂微 块冷凝后， 即成为药物微平板 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115181656 A 2一种用点滴板混制药物微 平板的制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 微生物学与植物病理学技术， 具体是一种用点滴板混制药物微平板的 制备方法。 技术背景 [0002]有害微生物引起的植物病害可引起巨大的经济损失及生态破坏， 当前及今后相当 长时期内， 植物病害防治的主要手段仍然是农药防治。 探索和挖掘生物源药物是农药防治 的重要方向。 当在众多的微生物源或植物源样本中寻找筛选具有抑制活性的样本， 其初级 筛测阶段若能以很少的代谢液(或组织液)即可检测识别抑制活性作用， 将能提高筛测效 率， 及扩大筛测范围。 在生物源药物的研究过程中， 探索分析有益微生物培养过程产生的代 谢产物对有害微生物的抑制作用， 当前 的分析检测技术往往需要终止一些培养瓶的培养， 以便能将培养产物进行过滤， 从而制备足够的检测样品， 而本领域技术人员最希望不用终 止培养过程而直接从培养瓶中抽取微量的样品进 行生物测定。 在发现微生物(或植物)能产 生抑制活性的代谢产物(或植物组织液)， 但抑制活性成分仍然未知的情况下， 一般需要进 行活性物的分离分析， 在分离活性物过程中， 往往需要对少量的分离样品进行生物活性跟 踪检测。 显然， 生物源农药的研发工作， 需要 有微量或少量药物样品检测的技 术支持。 [0003]当前本领域检测药物对有害微生物的抑制活性的常规技术方法主要是平板培养 测定方法， 该方法的技术要点是， 先将药物与水琼脂 混合制成含药培养平板， 再在 含药平板 上移植入有害微生物， 并在适当条件下培养， 通过观察比较有害微生物在平板上的生长量， 而达到测 算药物的抑制活性。 该方法的基本技术是含药培养平板的制备， 而当前含药培养 平板制备 的常规技术是， 将药物样品与水琼脂在三角瓶中混合后， 在常规培养皿中倒制成 含药培养平板。 这样的含药培养平板制备技术方法虽然简单成熟， 但有一明显的特征， 就是 待测药物样品往往需要达到几十毫升以上的样品量， 这与前述本领域希望的微量或少量样 品的检测技 术难以匹配， 因而是当前含药培 养平板制备技 术的重要弊病。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供一种用点滴板， 将微少量的药物样品液与水琼脂混合， 制 备 成含药微平板的方法。 [0005]本发明设计和采用微平板混样台的技术条件， 解决上述技术问题， 解决的技术方 案如下： [0006]1.设计一种微平板混样台， 主要构件包括控温体A， 混样用点滴板预热构件B， 药物 样品预热构件C， 枪头预热构件D， 载玻片预热瓷砖板构件E。 混样台适配在超净工作台上应 用。 [0007]控温体A主要构件包括盆状容器A1、 水体A2、 水体电热控温构件A3、 水体水面盖板 A4。 水体电热控温构件A3能将水体自动加热并稳定水体温度至70℃的工作状态， 水体水面 盖板A4能防止水体的快速蒸发与降温。说　明　书 1/5 页 3 CN 115181656 A 3