(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211075131.7 (22)申请日 2022.09.03 (71)申请人 云南省中 医医院(云南中 医药大学 第一附属医院) 地址 650021 云南省昆明市五华区光 华街 120号云南省中 医医院 (72)发明人 杜娜　林云　施雄飞　尧静　 李焕芹　马俊超　刘曦　刘晓敏　 李玉海　仇艳　 (74)专利代理 机构 北京成实知识产权代理有限 公司 11724 专利代理师 宋守金 (51)Int.Cl. C12M 1/36(2006.01) C12M 1/33(2006.01)C12M 1/24(2006.01) C12M 1/12(2006.01) C12M 1/04(2006.01) C12M 1/00(2006.01) G01N 1/28(2006.01) G01N 27/62(2021.01) (54)发明名称 血液微生物种类质谱鉴定的微生物提纯装 置及其使用方法 (57)摘要 本发明公开了一种血液微生物种类质谱鉴 定的微生物 提纯装置及其使用方法， 包括总控制 器、 粗过滤器、 裂解器、 精过滤器、 废液瓶和收集 瓶， 其特征在于： 所述粗过滤器下端连通裂解器 上端， 裂解器下端连通精过滤器上端， 精过滤器 下端连通废液瓶上端， 精过滤器侧壁连通收集 瓶； 所述粗过滤器上端通过管道连通微型气泵， 内部安装粗滤膜， 精过滤器下段内部安装精滤 膜， 精过滤器上端连通微型水泵。 本发明通过总 控制器电控实验步骤， 减少人工干预， 提高实验 精度； 首先滤除样本中的大体积物， 提升裂解效 率； 通过血细胞裂解液裂解残余血细胞， 然后在 精滤膜处过滤和清洗并排出收集， 简化了实验步 骤， 对实验员水平要求不高， 提纯率高， 鉴定准确 率高。 权利要求书2页 说明书7页 附图2页 CN 115216399 A 2022.10.21 CN 115216399 A 1.一种血液微生物种类质谱鉴定的微生物提纯装置， 包括总控制器、 粗过滤器、 裂解 器、 精过滤器、 废液瓶和收集瓶， 其特征在于： 所述粗过滤器下端 连通裂解器上端， 裂解器下 端连通精过滤器上端， 精过滤器下端连通废液瓶上端， 精过滤器侧壁连通收集瓶； 所述粗过 滤器上端通过管道连通微型气泵， 粗过滤器下段内部安装粗滤膜， 精过滤器下段内部安装 精滤膜， 粗过滤器、 裂解器、 精过滤器下端和精过滤器侧 壁的管道处均安装电磁阀； 裂解器 上端连通注液管， 精过滤器上端连通微型水泵； 裂解器、 废液瓶和收集瓶上端分别连通一个 空气过滤器。 2.根据权利要求1所述的一种血液微生物种类质谱鉴定的微生物提纯装置， 其特征在 于： 所述微型气泵的进气口处连通洗气瓶， 微型气泵的出气口处安装微生物滤膜； 所述微型 水泵进水口连通至 洗液瓶。 3.根据权利要求1所述的一种血液微生物种类质谱鉴定的微生物提纯装置， 其特征在 于： 所述粗滤膜上的孔洞直径为5 μm； 所述精滤膜上的孔洞直径为0.2 2 μm。 4.根据权利要求1所述的一种血液微生物种类质谱鉴定的微生物提纯装置， 其特征在 于： 所述裂解器上的注液 管上端安装橡皮塞； 精过 滤器侧壁的管道高于精滤膜所在位置 。 5.根据权利要求1所述的一种血液微生物种类质谱鉴定的微生物提纯装置， 其特征在 于： 所述粗过滤器、 裂解器、 精过 滤器、 废液瓶和收集 瓶上端开口处均设置密封塞盖 。 6.根据权利要求1所述的一种血液微生物种类质谱鉴定的微生物提纯装置， 其特征在 于： 所述总控制器内设置控制单元、 电源模块， 微型气泵、 微型水泵、 电磁阀、 控制面板和电 源模块电连接 至控制单 元； 所述控制面板安装在总控制器外壁， 控制面板包括屏幕和按键 。 7.一种血液微生物种类质谱鉴定的微生物提纯装置的应用， 其特征在于， 包括以下步 骤： Step1： 将该装置消毒后在无菌环境中组装并检查气密性， 关闭所有电磁阀； Step2： 将富集培养后的血液转移至粗过滤器内， 打开粗过滤器和裂解器之间的电磁 阀， 打开微型气泵， 将干净无菌的气体泵入， 在压力的作用下进行过滤， 将大部分血细胞滤 除， 滤液进入裂解器内后， 关闭微型气泵； Step3： 使用注射器从注液管内注入血细 胞裂解液， 静置一段 时间后， 直径小于5 μm血细 胞被完全裂解； 打开裂解器和精过 滤器之间的电磁阀， 将裂解器内液体转移至精过 滤器内； Step4： 关闭裂解器和精过滤器之间的电磁阀， 通过注射器从注液管注入清洗液， 然后 打开裂解器和精过 滤器之间的电磁阀， 将裂解器内液体转移至精过 滤器内； Step5： 重复2 ～4次Step4； Step6： 关闭裂解器和精过滤器之间的电磁阀， 打开精过滤器和废液瓶之间的电磁阀， 启动微型水泵， 将清洗液持续泵入精过滤器内， 并在压力的作用下流入废液瓶内， 微生物被 精滤膜拦截； Step7： 一段时间后， 打开精过滤器与收集瓶之间的电磁阀， 关闭精过滤器和废液瓶之 间的电磁阀， 液体流入收集 瓶内， 关闭微型 水泵， 关闭精过 滤器与收集 瓶之间的电磁阀； Step8： 取收集 瓶内液体离心， 取沉淀用于生 化鉴定。 8.根据权利要求7所述的一种血液微生物种类质谱鉴定的微生物提纯装置的应用， 其 特征在于， 所述的血细胞裂解液包括： 浓度为10～100 mM的缓冲液、 质量体积百分比为0％～ 3％的辅助裂解盐、 质量体积百分比为0％～40％的主要裂解盐、 质量体积百分比为0％～权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115216399 A 22％的表面活性剂、 浓度为0～10mM的螯合剂和体积百分0％～0.5％的消泡剂， 所述血液选 择裂解液B的pH为5～8； 所述清洗液包括： 浓度为10～ 100mM的所述缓冲液、 质量体积百分比为0 ％～5％的促进 杂质溶解盐和浓度为0～10mM的所述螯合剂， 所述清洗液的pH为5～ 9。 9.采用如权利要求1 ‑6中任一项所述的装置进行血液中微生物鉴定的方法， 包括以下 步骤： (1)按照如权利要求7或8所述的方法， 制备用于质谱鉴定的样品； (2)在所述样品中加入核酸提取试剂， 高速离心后弃除部分上清液， 将剩余溶液进行电 裂解或加入不同粒径组合的研磨珠振荡后高温加热、 离心， 使所述病原微生物裂解并促使 所述病原微 生物中的核酸释放、 溶解， 得到病原微 生物核酸样本； (3)取病原微 生物核酸样本点样到飞行质谱仪的靶板的孔 位上， 室温干燥； (4)覆盖基质于样本上， 室温干燥； (5)采用飞行时间质谱仪进行检测， 得到图谱数据； (6)数据分析： 对图谱数据进行分析， 得 出鉴定结果。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115216399 A 3